胃腺癌內鏡活檢和術后標本HER-2表達的一致性分析

劉金鑫　項珍珍　徐晶晶　白辰光③

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胃腺癌內鏡活檢和術后標本HER-2表達的一致性分析

劉金鑫①項珍珍②徐晶晶②白辰光②③

摘要目的：分析胃腺癌內鏡活檢和術后標本HER-2蛋白表達狀態的一致性，探討胃腺癌內鏡活檢標本HER-2檢測結果對應用曲妥珠單抗治療的指導價值。方法：選取2013年3月至2014年2月上海長海醫院病理科診斷明確的胃腺癌內鏡活檢標本及相應的腫瘤根治手術切除標本167例，并收集相關臨床病理資料。采用免疫組織化學（immuno histochemistry，IHC）方法檢測內鏡活檢標本的HER-2蛋白表達情況，用IHC及原位熒光雜交（fluorescence in situ hybridization，FISH）方法檢測相應腫瘤手術切除標本的HER-2蛋白表達和基因擴增狀況，對檢測結果進行比較，并結合臨床病理特征進行分析。結果：167例根治標本中，共有18例（10.8%）HER-2檢測呈陽性，其中包含10例IHC 3+與8例IHC 2+且FISH+的病例。相對應的內鏡活檢標本與根治手術標本的IHC檢測結果的一致率為82.0%，剔除IHC 2+的樣本后，真陽性率和真陰性率分別為73.3%和97.0%。結論：內鏡活檢標本HER-2蛋白IHC檢測具有較好預測價值，根治與活檢標本不一致的主要原因是腫瘤表達的異質性。通過提高內鏡活檢標本取材數，并結合FISH檢測結果，可以減少誤判。

關鍵詞胃腺癌HER-2內鏡活檢根治手術免疫組織化學熒光原位雜交

作者單位：①第二軍醫大學學員隊（上海市200433）；②上海長海醫院病理科；③第二軍醫大學病理學教研室

胃癌是當前威脅人類生存最嚴重的疾病之一，我國是胃癌的高發地區，發病率高于歐美，略低于日韓，總例數居全球第一［1］，且發現時多已至晚期，難以行手術切除，目前尚無更好的治療手段，生存率較低［2］。研究證實，酪氨酸激酶受體（RTKs），如HER-1、 HER-2、HER-3等的過表達預示更差的預后［3］。國內外ToGA研究證實曲妥珠單抗聯合化療可改善HER-2陽性晚期胃癌患者的生存［4-7］，這項成果已逐步應用于臨床。然而，對于HER-2基因的檢測，晚期患者只能用內鏡活檢標本評估，因此活檢標本對于腫瘤整體HER-2表達情況評估的一致性，對于用藥有重要指導意義。

本研究對2013年3月至2014年2月上海長海醫院收治的167例胃腺癌患者的臨床病理特征、HER-2表達情況及異質性進行統計學評估，分析活檢標本與術后標本HER-2表達狀況的一致性，為僅能行內鏡活檢而不能行手術切除的患者提供用藥指導。

1　材料與方法

1.1材料

收集2013年3月至2014年2月上海長海醫院病理科診斷明確的胃腺癌內鏡活檢標本及相應的腫瘤根治手術切除標本167例，所有患者術前未經放化療及免疫治療，其中男性104例、女性63例，年齡23～81歲。所有標本均經10%的中性福爾馬林液固定，石蠟包埋，常規H&E染色。所有H&E切片均由2名病理醫生在光鏡下觀察，進行病理診斷及分型。

1.2方法

1.2.1免疫組織化學（immunohistochemistry，IHC）檢測內鏡活檢和根治術標本均使用Leica BONDMAX全自動免疫組織化學儀進行HER-2蛋白檢測，HER-2抗體采用丹麥DAKO公司的A0485（1：400），采用pH=6.0檸檬酸緩沖液熱修復20 min進行抗原修復。結果評價依照《胃癌HER-2檢測指南》［8］進行。1.2.2熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridiza?tion，FISH）檢測根治手術標本使用北京金菩嘉公司的HER-2基因擴增檢測試劑盒，FISH檢測HER-2基因擴增狀態，評價標準依照《胃癌HER-2檢測指南》［8］。

1.3結果處理及分析

首先，統計分析根治手術標本IHC與FISH檢測的HER-2表達情況，明確最終表達狀態，將根治標本中IHC 3+或者IHC 2+且FISH+的病例定義為真陽性病例。然后分析內鏡活檢標本與根治手術標本HER-2表達狀況的差異，以評估活檢標本HER-2表達狀況與整體HER-2表達狀態的一致性。最后，篩選出根治手術標本與內鏡活檢標本表達不一致的病例，分析相關病理信息，查找原因和解決辦法。

2　結果

2.1根治手術標本HER-2表達情況

167例患者的根治手術標本HER-2表達情況，共有10.8%（18/167）HER-2呈陽性，其中包含10例IHC 3+與8例IHC 2+且FISH+的病例。根治手術標本FISH與IHC法檢測的HER-2表達情況基本一致，FISH陰性的143例中IHC 0/1+的137例，IHC 2+的6例；FISH陽性的21例中只有2例IHC 0/1+，其余病例均為IHC 2+/3+，；FISH可疑的3例被剔除（表1）。

2.2內鏡活檢與根治手術標本HER-2評判結果的比較

根治手術標本與內鏡活檢標本的IHC檢測HER-2表達差異（表2），一致的病例共計137例（82.0%），其中包括IHC 0/1+的124例、IHC 2+的4例和IHC 3+的9例。由于活檢標本未行FISH檢測，于是剔除IHC 2+的樣本，將IHC 3+計為HER-2陽性，IHC 0/1+計為HER-2陰性，計算結果顯示內鏡活檢標本HER-2 IHC檢測的真陽性率為73.3%（11/15），真陰性率為97%（128/132），其陰性評價的準確度優于陽性評價的準確度。而內鏡活檢標本IHC 2+共20例，其中根治手術標本HER-2陽性的3例，且均為腸型腺癌。

表1　根治標本IHC與FISH對于HER-2檢測情況的差異　例Table 2　Radical specimen differences during HER-2 detection by IHC and FISH　n

表2　活檢與根治標本IHC檢測情況差異　例Table 3 Biopsy and radical specimen differences during IHC testing n

3　討論

胃癌作為常見惡性腫瘤，對健康危害極大，我國胃癌發病率高，且發現時多為進展期，難以行手術切除［9］，因此通過藥物治療可延長生存期。近年來研究表明，曲妥單抗類藥物能顯著延長HER-2陽性胃癌患者的生存時間［10-12］，但我國胃癌發現時多處于進展期，眾多患者只有內鏡活檢標本，無法行根治手術取出完整的腫瘤標本評估。本研究目的是評估內鏡活檢標本與根治手術標本HER-2表達的一致性，并以此指導臨床藥物使用。

本研究首先分析手術標本的陽性率與表達情況，術后標本IHC與FISH法檢測HER-2表達結果基本一致。167例患者共有10.8%（18/167）的根治標本HER-2呈陽性，略低于ToGA實驗［4］，可能是本研究病例中進展期患者較多，略高于國外實驗［6］，可能與其例數較少有關。FISH陰性的143例中IHC 0/1+137例，IHC 2+ 6例，而FISH陽性的20例中，只有2例IH 0/1+。所以在對根治標本進行最終HER-2結果評估時，FISH作為IHC 2+病例的輔助判斷標準來使用，這與國內類似研究一致［13］。

本研究分析內鏡活檢標本HER-2表達與根治手術標本HER-2的差異。結果顯示，IHC方法總的一致性為82.0%（137/167），由于活檢標本缺少FISH數據，剔除IHC 2+樣本后的真陽性率為73.3%（11/15），真陰性率為97.0%（128/132），20例內鏡活檢IHC 2+標本所對應的根治手術標本HER-2陽性為3例。內鏡活檢標本與根治手術標本HER-2檢測結果具有較高的一致性，但真陽性率略低，這與國外研究結果類似［14］，內鏡活檢HER-2陽性的患者還需要進一步分析，相關原因可能是胃腫瘤組織HER-2表達的異質性［15］，淺表組織較深部組織HER-2表達更強。

本研究分析根治手術與內鏡活檢標本評估病例不一致的原因，最終可評估為8例，由于內鏡活檢標本取的只是腫瘤表面的一部分組織，腫瘤異質性使內鏡活檢組織難以反映整體狀況。針對此現象，國外學者建議取更多的（6～8塊）活檢標本來提高檢測結果的準確度［15］，本研究的內鏡活檢標本取材塊數為2～7塊，判斷偏差較大的患者大部分活檢標本數都較少，為2～4塊，這可能是不夠準確的重要原因。

綜上所述，本研究整體分析胃腺癌內鏡活檢標本HER-2 IHC檢測結果與根治手術標本HER-2檢測結果的一致性。內鏡活檢標本IHC檢測陰性對于HER-2陰性的鑒別準確度較高，但若IHC檢測結果為IHC 3+或IHC 2+，由于存在腫瘤表達異質性等原因，還需謹慎判斷。

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（2016-01-04收稿）

（2016-04-05修回）

（編輯：楊紅欣校對：孫喜佳）

劉金鑫專業方向為腫瘤病理學診斷。E-mail：83791663@qq.com

·臨床研究與應用·

Consistency analysis of gastric cancer HER-2 expression among endoscopic biopsy and radical operation specimens

Jinxin LIU1，Zhenzhen XIANG2，Jingjing XU2，Chenguang BAI2，3

1The Second Military Medical University，Shanghai 200433，China；2Department of Pathology，Shanghai Changhai Hospital，The Second Military Medical University，Shanghai 200433，China；3Department of Pathology，The Second Military Medical University，Shanghai 200433，China

Correspondence to：Chenguang BAI；E-mail：blk709@sina.com

AbstractObjective：To analyze the consistency of HER-2 expression among endoscopic biopsy and radical operation specimens of gastric adenocarcinoma and to investigate the clinical application value of HER-2 detection in trastuzumab treated patients.Methods：From March 2013 to February 2014，167 patients from Shanghai Changhai Hospital were diagnosed with gastric adenocarcinoma using endoscopic biopsy specimens.The corresponding surgical specimens were collected for pathological analysis.The relevant clinical and pathological data were collected.HER-2 protein expression of endoscopic biopsy specimens was detected by immunohistochemistry （IHC）.HER-2 protein expression and gene amplification status of the corresponding tumor resection specimens were detected by IHC and fluorescence in situ hybridization（FISH）.Results were analyzed for clinicopathological characteristics.Results：Among the 167 cases，18 cases（10.8%）were HER-2 positive，including 10 cases showing IHC3+ and 8 cases showing IHC2+ with FISH positive.The consistency rate result among endoscopic biopsy and surgical operation specimens was 82%.Excluding the cases showing IHC2+，the true positive rate and the true negative rate were 73.3%and 97.0%，respectively.Conclusion：HER-2 detection of endoscopic biopsy specimen by IHC shows great predictive value.The main reason for the difference of surgery and biopsy specimens is the heterogeneity of tumor expression.Increasing the number of specimens and combined testing with FISH are important methods to reduce misjudgement.

Keywords：gastric adenocarcinoma，HER-2，endoscopic biopsy，radical operation，immunohistochemistry，fluorescence in situ hybridization

doi：10.3969/j.issn.1000-8179.2016.10.013

通信作者：白辰光blk709@sina.com

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