男性不育患者精漿中性粒細胞彈性蛋白酶濃度對精子質量的影響

何碧英，彭　明

(廣東省中山市中醫院檢驗科　528400)

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·論著·

男性不育患者精漿中性粒細胞彈性蛋白酶濃度對精子質量的影響

何碧英，彭明

(廣東省中山市中醫院檢驗科528400)

摘要:目的探討男性不育患者精子的質量與精漿中性粒細胞彈性蛋白酶的相關性。方法檢測130例不育男性的中性粒細胞彈性蛋白酶濃度，根據精液中性粒細胞彈性蛋白酶濃度將研究對象分為三組，大于1 000 ng/mL為A組， 250～1 000 ng/mL為B組,小于250 ng/mL為C組，對各組精漿中的精液基本參數和生化指標(酸性磷酸酶、枸櫞酸、鋅和果糖)進行測定。結果(1)A、B、C三組間，精液密度和精子活動率差異有統計學意義(P<0.05)，且中性粒細胞彈性蛋白酶濃度與精液密度(r=-0.43)和精子活動率(r=-0.37)，精液體積及正常精子形態差異無統計學意義(P>0.05)；(2)A、B、C三組間，酸性磷酸酶、檸檬酸和鋅濃度差異有統計學意義(P<0.05)，且中性粒細胞彈性蛋白酶的濃度與磷酸酶(r=-0.19)、檸檬酸(r=-0.17)和鋅(r=-0.23)的濃度呈顯著負相關，三組間果糖濃度差異無統計學意義(P>0.05)。結論精液中性粒細胞彈性蛋白酶的水平與精液密度、精子活動率及生化指標參數(酸性磷酸酶、檸檬酸和鋅)呈顯著負相關，提示精液中性粒細胞彈性蛋白酶對精子的質量有負面的影響，進而影響男性的生育能力。

關鍵詞:男性不育；中性粒細胞；彈性蛋白酶；精液質量

中性粒細胞彈性蛋白酶屬于鋅離子和鈣離子依賴性基質降解酶，其可降解細胞外基質中的所有蛋白，在中性粒細胞內，彈性蛋白酶的濃度很高，每10個細胞中含有中性粒細胞彈性蛋白酶的總量約為3 μg[1]。正常生理條件下，中性粒細胞彈性蛋白酶有益于有害病菌的清除及受損組織的再生愈合，然而其高度活化則會對組織器官造成損傷?，F今發現，這類降解酶的活化與男性前列腺炎癥、生殖道的感染息息相關，精液中的中性粒細胞彈性蛋白酶可破壞精液中的有益成分，如免疫球蛋白結合因子、內氨酰氨基肽酶和膜聯蛋白Ⅰ等[2-3]。本文旨在探討男性不育患者精子的質量(常規參數及酸性磷酸酶、檸檬酸、果糖和鋅等生化指標)與中性粒細胞彈性蛋白酶之間的關系，進而為中性粒細胞彈性蛋白酶如何影響男性不育提供依據。

1資料與方法

1.1一般資料130例男性不育患者均來自2013年10月至2014年12月本院泌尿男科，入選標準：(1)患者年齡在23～50歲，以降低年齡因素對研究因素的影響；(2)婚后性生活正常，但1年以上不育，性功能無障礙，附睪、睪丸、輸精管等無異常，無家族性遺傳??；(3)患者未接受過正規的相關治療，以排除治療因素對研究因素的影響。排除標準：(1)無精子癥;(2)精液的體積小于1.8 mL,無法進行相關精液的分析。

1.2方法

1.2.1精液標本的收集禁欲3～5 d后手淫，在取精室收集精液于消毒杯內，標本置于37 ℃恒溫金屬浴中完全液化后，操作嚴格按照世界衛生組織的標準。

1.2.2精漿中性粒細胞彈性蛋白酶濃度檢測液化的精漿使用超濾柱(Ultrafree-0.5)除去蛋白質，采用精漿彈性蛋白酶定量檢試劑盒(上海勝隆實業有限公司)酶聯免疫吸附試驗(ELISA)測定中性粒細胞彈性蛋白酶的濃度，于450 nm波長下檢測吸光度值[4]，具體操作按照試劑盒操作說明書。

1.2.3分組參照已有文獻[1-5]及根據130例精漿標本中性粒細胞彈性蛋白酶濃度檢測結果，將檢測標本分成3組：>1 000 ng/mL為A組，250～1 000 ng/mL為B組,<250 ng/mL為C組。各組之間具有可比性。

1.2.4各組精漿基本參數及生化指標的測定在SFA-500精液分析系統上進行精子密度、精子活動率和形態等參數的分析，根據世界衛生組織分析標準，精子密度大于或等于20×106/mL,a、b級精子活動率大于或等于50%，正常形態精子大于或等于15%為正常。采用精漿檸檬酸測定試劑盒、精漿果糖測定試劑盒和精漿鋅定量檢測試劑盒(深圳華康生物醫學工程有限公司)測定精液中檸檬酸、果糖和鋅的濃度，精漿酸性磷酸酶的測定采用精漿酸性磷酸酶檢測試劑盒(南京欣迪生物醫藥工程有限責任公司)，具體操作按照試劑盒操作說明書。

2結果

2.1中性粒細胞彈性蛋白酶的濃度A組不育患者49例，彈性蛋白酶濃度(1 900±985)ng/mL;B組不育患者40例，彈性蛋白酶濃度(498±146)ng/mL；C組不育患者41例，彈性蛋白酶濃度(140±95)ng/mL。

2.2精液參數分析3組的精液體積進行比較，差異無統計學意義(P=0.308 7),即不育患者精液體積與彈性蛋白的濃度無相關。3組的正常精子形態進行比較，差異無統計學意義(P=0.706 3)。3組的精子密度進行比較，結果顯示,精子密度與彈性蛋白濃度呈顯著負相關(r=-0.43,P=0.003)。3組的精子活動率進行比較,結果表明,精子活動率與彈性蛋白濃度呈顯著負相關(r=-0.37,P=0.02)，見表1。

表1　精液參數分析

2.3各組生化指標的測量結果3組的酸性磷酸酶的濃度比較，差異有統計學意義(P=0.005),相關性的分析結果顯示，中性粒細胞彈性蛋白酶的濃度與酸性磷酸酶的濃度呈負相關(r=-0.19)。3組的檸檬酸濃度比較，差異有統計學意義(P=0.023)，相關性的分析結果表明，中性粒細胞彈性蛋白酶的濃度與檸檬酸濃度呈負相關(r=-0.17)。3組鋅濃度進行比較，差異有統計學意義(P=0.015),相關性的分析結果顯示，中性粒細胞彈性蛋白酶的濃度與鋅濃度呈負相關(r=-0.23)。3組果糖濃度進行比較，差異無統計學意義(P=0.15)。見表2。

表2　各組精液生化指標的濃度±s)

3討論

在傳統的男性不育診斷中，精液中精子的密度、能動性及其形態都作為預測男性生育能力的基本參數，但是其他癥狀或者隱形的因素也會對精漿中的成分造成影響，進而影響精子功能的發揮。中性粒細胞彈性蛋白酶來源于中性粒細胞，在正常生理條件下，中性粒細胞彈性蛋白酶對宿主起保護的作用，它與其蛋白酶抑制劑保持平衡的狀態，在疾病狀態下，蛋白酶抑制劑對中性粒細胞彈性蛋白酶的調節失控，使其高度活化，進而侵入其他組織和器官，造成損失或者引起功能的發揮障礙。關于中性粒細胞彈性蛋白酶對泌尿生殖系統的影響一直以來備受關注，尤其是在不育癥的診斷方面[6-9]。酸性磷酸酶、檸檬酸、果糖和鋅是精漿中的重要成分，酸性磷酸酶、檸檬酸和鋅的水平能反映前列腺的分泌功能狀態[10-12]。本研究結果表明，彈性蛋白酶顯著影響精子的密度及精子的能動性，但對精液的體積及其形態無明顯影響。中性粒細胞彈性蛋白酶與酸性磷酸酶、檸檬酸和鋅的濃度呈顯著的負相關，說明中性粒細胞彈性蛋白酶會引起前列腺部分分泌成分的變化，精漿作為一種介質把精子輸送到女性生殖道內，為精子提供營養及能量，約有30%的精漿為前列腺液，即前列腺分泌成分與精子的質量息息相關?，F有的報道認為，精液中中性粒細胞彈性蛋白酶濃度的增加會引起不穩定的分子活性氧的產生，造成組織的氧化損傷[13-16]。本研究結果提示，中性粒細胞彈性蛋白酶濃度的增加會對前列腺組織器官造成不利影響，影響其分泌功能，進而影響精子質量。果糖由精囊分泌，是精子能量代謝的重要來源[17]，約有60%的精漿由精囊分泌。本研究結果顯示，中性粒細胞彈性蛋白酶的濃度對果糖的濃度無明顯影響，提示中性粒細胞彈性蛋白酶的濃度(140～1 900 ng/mL)對精囊分泌的果糖無影響，但對精囊分泌的其他成分還有待進一步研究，即中性粒細胞彈性蛋白酶是否有可能通過影響精囊進而影響精子的質量仍需探討。本研究結果顯示，精液中性粒細胞彈性蛋白酶的濃度與生化指標參數(酸性磷酸酶、檸檬酸和鋅)、精子密度及精子能動性呈顯著負相關，即中性彈性蛋白酶與精子的質量密切相關，對男性生育能力存在潛在的負面影響。

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作者簡介：何碧英，男，主管技師，主要從事臨床檢驗方面研究。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.13.022

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)13-1804-03

(收稿日期：2016-01-07修回日期：2016-03-20)

Influence of neurtophil elastase on sperm quality in male infertile patients

HEBiying,PENGMing

(DepartmentofClinicalLaboratory,ZhongshanMunicipalHospitalofTraditionalChineseMedicine,Zhongshan,Guangdong528400,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the relationship between sperm quality and neurtophil elastase (NE) in male infertile patients.Methodsthe NE concentration was detected in1 30 male infertile patients,the research subjects were classified into 3 groups based on the neurtophil elastase concentration:neurtophil elastase concentration more than 1 000 ng/mL (group A ),250-1 000 ng/mL (group B) less than 250 ng/mL (group C).Then sperm basic parameters and biochemical markers (phosphatase,citrate,zinc and fructose) were detected.Results(1) The sperm density and motility showed statistically significant differences among the group A,B and C(P<0.05)moreover neutrophil elastase concentration was negatively correlated with sperm density (r=-0.43) and sperm motility(r=-0.37).Sperm volume and morphology showed no statistically significant differences among three groups(P>0.05).(2) There were statistically significant differences in the levels of phosphatase,citrate and zinc among three groups(P<0.05),moreover the neutrophil elastase concentration had significantly negative correlation with the concentrations of phosphatase,citrate and zinc(r=-0.19,r=-0.17,r=-0.23),while the fructose concentration had no statistical difference among three groups(P>0.05).ConclusionThe NE level in semen has significant reverse correlation with sperm density,sperm motility and biochemical markers (phosphatase,citrate and zinc),implying that semen NE has significantly negative effect on the sperm quality,thus affecting male fertility ability.

Key words:male infertility;neurtophil;elastase;sperm quality