兒童配方奶粉對小鼠骨骼發育影響的研究

楊麗,劉恬欣,方正峰,敖曉琳,韓國全,陳洪

(四川農業大學 食品學院,四川 雅安,625014)

骨骼發育是一個復雜且動態的過程,其中涉及多種細胞和生長因子[1]。而骨骼發育不良是一類影響骨和軟骨組織組成與結構的發育性疾病,會誘發骨質疏松在內的多種骨骼相關疾病,主要表現包括肢端畸形、身材矮小、關節松弛、骨密度異常等[2]。

腸道菌群被稱為人體內的“第二基因組”,維持人體與腸道微生物良好的共生關系,對人體健康至關重要[3]。近年來,越來越多的研究已經證明,腸道菌群可以調節骨骼發育[4-6]。進一步的研究表明,腸道菌群可以通過調節鈣的吸收和免疫系統來影響骨骼發育[7-8]。鈣是動物體內含量最多的礦物元素,對骨骼完整性和代謝平衡起著重要作用[9]。腸道菌群的代謝產物可直接促進鈣吸收,也可增大腸上皮吸收面積,進而促進腸道鈣的吸收。免疫系統與骨骼系統之間的關系被稱為“骨免疫學”,當機體的免疫功能失調時,可導致骨代謝異常。腸道菌群可以調節宿主免疫相關細胞因子,降低骨吸收標志物和激活劑的水平,防止骨質流失,且骨形成標志物也顯著增加。

奶粉一般是以新鮮牛乳為主要原料,富含優質的蛋白質、碳水化合物和多種礦物質。每天喝適量的奶粉可以促進兒童的生長發育,補充鈣與維生素D。本試驗2種奶粉含有不同量的膳食纖維及其他活性成分,這些成分可以改變腸道菌群的組成,進而影響骨骼發育[10-11]。因此,本實驗建立骨骼發育不良模型對比2種奶粉對骨骼發育的影響及其腸道菌群介導的機制。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

40只3周齡雌性ICR小鼠,購自成都達碩實驗動物有限公司,實驗動物生產許可證號:SCXK(川)2020-030。實驗飼料為美國AIN-93G標準飼料,購于北京博泰宏達生物技術有限公司。

奶粉1、奶粉2,市售。

地塞米松磷酸鈉注射液,辰欣藥業股份有限公司;小鼠Ⅰ型膠原N端前肽(type I procollagen N-terminal propeptide,PINP)試劑盒、小鼠堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)試劑盒、小鼠抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRACP)試劑盒、小鼠腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)試劑盒、小鼠白細胞介素-1β(interleukin 1,IL-1β)試劑盒、小鼠白細胞介素-6(interleukin 6,IL-6)試劑盒、小鼠白細胞介素-10(interleukin10,IL-10)試劑盒,江蘇酶免實業有限公司;鈣測試盒,南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設備

熒光酶標儀,賽默飛世爾科技公司;1176型小動物Micro-CT掃描影像系統,德國SkyScan公司;MiSeq PE300高通量測序平臺,美國Illumina公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 奶粉的配方和營養成分

奶粉1配料表:生牛乳、乳糖、全脂乳粉、脫脂乳粉、脫鹽乳清粉、濃縮乳清蛋白粉(WPC80)、低聚果糖、維生素K2、維生素B1(鹽酸硫胺素)、維生素B2(核黃素)、維生素B6(鹽酸吡哆醇)、維生素B12(氰鈷胺)、維生素C(L-抗壞血酸)、煙酸、葉酸、泛酸(D-泛酸鈣)、生物素(D-生物素)、膽堿(氯化膽堿)、?；撬?、左旋肉堿(L-肉堿)、二十二碳六烯酸油脂、花生四烯酸油脂、CaCO3、FeSO4、葡萄糖酸鋅、亞硒酸鈉、葉黃素、乳鐵蛋白、酵母β-葡聚糖(添加量20.0 mg/100 g)、水解蛋黃粉(添加量50.0 mg/100 g)、初乳堿性蛋白(添加量50.0 mg/100 g)、燕窩酸(添加量10.0 mg/100 g)、磷脂酰絲氨酸(添加量11.0 mg/100 g)、動物雙歧桿菌Bb-12(添加量≥1.0×108CFU/100 g)。

奶粉2配料表:生牛乳、脫脂乳粉、脫鹽乳清粉、乳糖、植物油、低聚異麥芽糖、低聚半乳糖、低聚果糖、骨膠原蛋白肽、初乳堿性蛋白、酵母β-葡聚糖、水解蛋黃粉、N-乙酰神經氨酸、二十二碳六烯酸、花生四烯酸、動物雙歧桿菌Bb-12、乳酸菌粉(乳雙歧桿菌、短雙歧桿菌、發酵乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌)、氯化膽堿、葉黃素、?；撬?、左旋肉堿、富硒酵母、L-抗壞血酸鈉、dl-α-醋酸生育酚、醋酸視黃酯、膽鈣化醇、D-泛酸鈣、鹽酸硫胺素、鹽酸叱哆醇、葉酸、氰鈷胺、核黃素、煙酰胺、D-生物素、維生素K2、MgSO4、FeSO4、ZnSO4、CaCO3。每100 g添加:骨膠原蛋白肽200 mg,初乳堿性蛋白100 mg,酵母β-葡聚糖100 mg,水解蛋黃粉50 mg,N-乙酰神經氨酸10 mg,動物雙歧桿菌Bb-12、乳雙歧桿菌、短雙歧桿菌、發酵乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌均為1.0×108CFU。2種奶粉的營養成分如表1。

1.3.2 動物實驗

實驗方案經四川農業大學倫理委員會批準,并嚴格按照四川農業大學《實驗動物保護和使用規則》執行。小鼠在溫度20～25 ℃、相對濕度50%～60%的環境下,給予12 h光照/12 h黑暗交替條件,自由飲食、飲水,適應性喂養1周后,將小鼠按體質量隨機分為4組:正常對照組(CON)、地塞米松組(DEX)、地塞米松+奶粉1組(DEX+MP1)、地塞米松+奶粉2組(DEX+MP2),分組后繼續喂養8周。CON組和DEX組飼喂標準純化日糧,DEX+MP1組和DEX+MP2組飼喂定制純化日糧(日糧中添加質量分數為5%的奶粉)。模型組和處理組按照1 mg/kg的劑量肌肉注射地塞米松磷酸鈉注射液,注射量為100 μL,每周3次,建立骨骼發育不良模型,CON組肌肉注射等量的NaCl注射液。

表1 兩種奶粉的營養成分表Table 1 Nutritional composition of two kinds of milk powder

1.3.3 體質量及采食量的測定

實驗開始時每天記錄每組小鼠的采食量,根據次日的余糧算出每只小鼠的日均采食量。小鼠禁食12 h后測量體質量,每周1次。

1.3.4 樣品采集

飼喂8周后,收集糞便于凍存管中,放入液氮,轉入-80 ℃冰箱保存待測。對小鼠注射戊巴比妥鈉(200 mg/kg BW)將其麻醉,摘眼球取血液樣品于管中,靜置1～2 h,4 ℃下3 000 r/min離心15 min,吸取上清液,放入-20 ℃冰箱待測。小鼠脫頸處死后解剖,取股骨、脛骨,剔除多余肌肉筋膜及結締組織后放于10%(體積分數)的甲醛固定液中待測。

1.3.5 股骨和脛骨的骨重、骨長的測定

用電子天平對骨組織的骨重進行測量;用游標卡尺對骨組織的骨長進行測量。

1.3.6 骨微結構的測定

取固定液中的股骨通過Micro-CT掃描影像系統進行掃描,掃描股骨遠端的骨小梁部分,分辨率為9 μm,計算骨密度(bone mineral density,BMD)、骨小梁數量(trabecular number,Tb.N)、骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)、骨小梁分離度(trabecular separation,Tb.Sp)。

1.3.7 血清PINP、ALP、TRACP、鈣含量的測定

將收集的血清按試劑盒說明書操作步驟測定PINP、ALP、TRACP、鈣的含量。

1.3.8 血清中炎癥因子含量的測定

將收集的血清按試劑盒說明書操作步驟測定TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的含量。

1.3.9 16S rRNA高通量測序及微生物多樣性分析

將收集的糞便樣本,寄送至北京百邁客生物科技有限公司進行高通量測序文庫的構建和Illumina MiSeq測序。使用PowerSoilRDNA Isolation Kit 試劑盒提取糞便中的細菌總DNA。對16s RNA基因V3～V4區域片段進行擴增,擴增產物進行高通量測序。使用Usearch軟件對Reads在97.0%的相似度水平下進行聚類、獲得操作分類單元。進一步采用α多樣性分析、β多樣性分析、物種組成及差異分析等方法獲得微生物相關信息。

1.4 數據處理與分析

實驗數據用平均值±標準差表示。采用SPSS 26進行單因素方差分析,通過Duncan檢驗進行顯著性分析,P<0.05表示顯著差異,采用Origin 9.1軟件繪圖,采用Hiplot進行皮爾遜相關性分析并做圖。

2 結果與分析

2.1 奶粉對小鼠生長指數的影響

如圖1-a所示,小鼠飼養8周后,與CON組相比,DEX組小鼠體質量下降;與DEX組相比,2種奶粉添加后體質量有所增加。與CON組相比,DEX組采食量顯著降低;而添加奶粉1后采食量有所增加,并在添加奶粉2后達到顯著水平,表明注射地塞米松會導致小鼠采食量下降,進而降低體質量,而奶粉的添加改善了小鼠的采食量。

a-奶粉對小鼠體質量的影響;b-小鼠的日均采食量圖1 奶粉對小鼠生長指數的影響Fig.1 Effect of milk powder on growth index of mice 注:同一指標,不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)(下同)。

2.2 奶粉對小鼠骨組織的影響

如圖2所示,與CON組相比,DEX組的骨長、骨重顯著下降;與DEX組相比,2種奶粉添加后股骨骨長和骨重有明顯改善,而脛骨骨組織無顯著變化,且2種奶粉之間沒有顯著差異。

2.3 奶粉對小鼠骨微結構的影響

BMD是評價骨質量和骨強度的重要指標,骨微結構是骨小梁的三維構筑及小梁間連接程度的統稱。圖3反映了各組小鼠的骨微結構,與CON組相比,DEX組的BMD顯著下降,Tb.sp顯著增加。而與DEX組相比,2種奶粉添加后都顯著增加了BMD,并降低了Tb.sp,表明奶粉的添加可以改善骨微結構。此外,DEX+MP1組的Tb.N顯著高于其他3組,表明奶粉1對骨微結構的改善效果優于奶粉2。

a-股骨骨長;b-股骨骨重;c-脛骨骨長;d-脛骨骨重圖2 奶粉對小鼠骨組織的影響Fig.2 Effect of milk powder on bone tissue of mice

a-BMD;b-Tb.N;c-Tb.sp;d-Tb.Th;e-CON組骨結構照片;f-DEX組骨結構照片;g-DEX+MP1組骨結構照片;h-DEX+MP2組骨結構照片圖3 奶粉對小鼠骨微結構的影響Fig.3 Effect of milk powder on bone microstructure of mice

2.4 奶粉對小鼠血清骨轉換標志物及鈣含量的影響

骨轉換標志物反映骨形成和骨吸收水平及其活躍程度,PINP和ALP屬于骨形成標志物,TRACP屬于骨吸收標志物。圖4-a～圖4-c反映了小鼠血清中骨轉換標志物的含量差異。與CON組相比,DEX組的PINP含量顯著增加,TRACP含量顯著下降。與DEX組相比,2種奶粉添加后都顯著增加了ALP和TRACP的含量,表明2種奶粉添加后促進了骨形成和骨吸收標志物的形成。此外,與DEX+MP1組相比,DEX+MP2組顯著增加了PINP和TRACP的含量。結果表明,2種奶粉添加后都會提高骨轉換速率,奶粉2的效果更顯著。與CON組相比,DEX組血清中鈣含量顯著降低;與DEX組相比,2種奶粉添加后血清中鈣的含量顯著增加(圖4-d),表明奶粉的添加促進了血清中鈣的吸收,且2種奶粉之間沒有顯著差異。

a-PINP;b-ALP;c-TRACP;d-鈣含量圖4 奶粉對小鼠血清骨轉換標志物及鈣含量的影響Fig.4 Effect of milk powder on serum bone turnover markers and calcium content in mice

2.5 奶粉對小鼠血清中炎癥因子的影響

炎癥因子參與機體的生理及病理過程,IL-1β、IL-6和TNF-α屬于促炎細胞因子,IL-10屬于抗炎細胞因子,促炎細胞因子會刺激骨吸收,還能加強其他細胞因子的作用。圖5反映了血清中炎癥因子的含量,與CON組相比,DEX組IL-1β、IL-6含量顯著增加,IL-10含量顯著降低;與DEX組相比,2種奶粉添加后降低了IL-1β的含量,增加了IL-10的含量,表明奶粉的添加通過降低促炎細胞因子水平和增加抗炎細胞因子水平來促進骨骼發育。此外,與DEX+MP1組相比,DEX+MP2組降低了IL-6和IL-10的含量,表明奶粉1可能是通過增加抗炎細胞因子的含量促進骨骼發育,奶粉2可能是通過降低促炎細胞因子的含量促進骨骼發育。

2.6 奶粉對小鼠腸道菌群的影響

2.6.1 α多樣性分析

α多樣性反映單個樣品物種豐度及多樣性,ACE指數衡量物種豐度即物種數量的多少,Shannon指數和Simpson指數衡量物種多樣性,受樣品群落中物種豐度和物種均勻度的影響。結果如表2所示,與CON組相比,DEX組中的多樣性指數無顯著變化,表明地塞米松對α多樣性沒有顯著影響。與DEX組相比,2種奶粉添加后多樣性有所下降,表明奶粉的添加降低了由地塞米松引起的腸道菌群紊亂。此外,與DEX+MP1組相比,DEX+MP2組的多樣性顯著下降,表明奶粉2的添加降低了物種多樣性。

表2 奶粉對小鼠腸道菌群α多樣性的影響(n=6)

2.6.2 β多樣性分析

β多樣性反映各組小鼠腸道菌群組成的相似性或差異性。

a-TNF-a;b-IL-1β;c-IL-6;d-IL-10圖5 奶粉對小鼠血清炎癥因子含量的影響Fig.5 Effect of milk powder on serum inflammatory factors in mice

如圖6-a所示,各組出現明顯分離,與DEX組相比,DEX+MP1組和DEX+MP2組微生物群落向右偏移,表明2種奶粉的添加在一定程度上能改變腸道菌群的結構。與DEX+MP1組相比,DEX+MP2組與DEX組表現出更遠的距離,表明奶粉2的添加會顯著改變腸道菌群的組成。非加權組平均法的結果也表明,不同樣本之間的物種組成存在較大差異(圖6-b)。

2.6.3 腸道微生物菌落組成分析

圖7-a為門水平上各組的物種組成分類柱狀圖,其中Firmicutes和Bacteroidota是豐度最高的2個菌門。比較組間豐度變化發現,與CON組相比,DEX組增加了Bacteroidota和Verrucomicrobiota的相對豐度;與DEX組相比,2種奶粉添加后增加了Firmicutes和Verrucomicrobiota的相對豐度,降低了Bacteroidota的相對豐度。此外,奶粉2的添加顯著增加了Firmicutes的相對豐度,降低了Bacteroidota的相對豐度。在屬水平上,如圖7-b所示,與CON組相比,DEX組中Lactobacillus和Bacteroides的相對豐度增加,unclassified_Desulfovibrionaceae的相對豐度降低。與DEX組比較,DEX+MP1組Akkermansia和Alloprevotella的相對豐度增加,Lactobacillus、unclassified_Muribaculaceae和Alistipes的相對豐度降低;DEX+MP2組Lactobacillus和Lachnoclostridium的相對豐度增加,unclassified_Muribaculaceae和Alistipes的相對豐度降低。進行LEfSe分析確定了各組間的差異物種(圖7-c和圖7-d)。在屬水平上,奶粉1處理增加了f__Prevotellaceae,s__Prevotella_sp__canine_oral_taxon_226,g__Alloprevotella的豐度。奶粉2處理增加了g__Lachnoclostridium的豐度。

a-主坐標分析;b-非加權組平均法圖6 奶粉對小鼠腸道菌群β多樣性的影響Fig.6 Effect of milk powder on β diversity of intestinal flora in mice

a-門水平腸道菌群結構;b-屬水平腸道菌群結構;c-組間差異物種LDA值分布柱狀圖;d-組間差異物種進化分支圖圖7 各組小鼠腸道微生物菌群組成及差異物種分析Fig.7 Composition of intestinal microflora and analysis of different species of mice in each group

2.7 骨相關生物學指標與腸道菌群相關性分析

為了尋找骨相關指標與腸道菌群之間可能存在的聯系,我們進行了皮爾遜相關性分析(圖8)。結果表明,在屬水平上,并不是所有的生物學變化都與微生物群落的變化相關。在血清骨轉換標志物方面,血清PINP與Alistipes呈負相關;血清ALP與unclassified_Muribaculaceae、Muribaculum和Alistipes呈負相關;血清TRACP與unclassified_Muribaculaceae和Alistipes呈負相關。這些結果說明血清骨轉換標志物與不同腸道菌群之間存在相關性,腸道菌群可能參與調控骨轉換標志物水平。

3 討論

骨骼發育不良,也稱為骨軟骨發育不良,其特征是骨骼嚴重受累,伴有軟骨和骨骼生長異常,導致骨長度、骨形狀或骨密度異常[12-13]。研究表明[14-15],長期使用糖皮質激素會導致骨質流失,在糖皮質激素的長期作用下,成骨和破骨細胞凋亡增加,骨轉換下降,骨密度降低,骨骼生長受到抑制。而地塞米松作為糖皮質激素的一種,可以使生長板靜止帶和肥大帶軟骨細胞糖皮質激素受體表達增強,抑制骨骼縱向生長,進而我們使用地塞米松對小鼠構建骨骼發育不良模型[16]。本實驗中,通過地塞米松刺激致使小鼠產生骨骼發育不良反應,導致小鼠體質量和采食量下降。2種奶粉添加后,體質量和采食量均有所增加,這可能與奶粉本身的性質與所含能量有關。2種奶粉的添加使股骨組織和骨微結構得到改善,表明2種奶粉的添加緩解了地塞米松對小鼠骨骼生長的抑制,這與張會豐等[15]的研究結果類似。此外,奶粉1對骨微結構的改善效果優于奶粉2,可能與奶粉1中所含二十二碳六烯酸含量有關。二十二碳六烯酸屬于n-3多不飽和脂肪酸,研究表明長期補充n-3脂肪酸對骨微結構產生有利影響[17]。另有研究表明攝入較多的n-3脂肪酸與較高的股骨密度之間存在關聯[18]。

圖8 骨相關生物學指標與腸道菌群相關性分析Fig.8 Correlation analysis between bone-related biological indicators and intestinal flora

此外,我們進一步分析了血清骨轉換指標。ALP可以比較確切地反映骨形成功能狀態,其含量升高說明骨形成增加[19],TRACP主要來源于破骨細胞,且被認為直接參與破骨細胞的骨吸收過程,與其他酶一起參加骨基質中固體鈣磷礦化物的降解[20]。在本研究中,2種奶粉添加后顯著提高骨轉換速率,進而改善小鼠的骨骼發育情況。而地塞米松處理后的小鼠骨形成標志物增加,可能是成骨細胞和破骨細胞參與骨重建,使骨轉換率升高。皮爾遜相關性分析的結果表明,Alistipes和unclassified_Muribaculaceae與血清骨轉換標志物呈負相關關系,表明這2種菌可能參與調節骨骼發育。研究表明[21-22],溫暖暴露能防止骨質流失,而溫暖暴露后Muribaculaceae在屬水平上明顯減少;飼糧中添加魔芋低聚糖對骨骼健康有益,而Alistipes的相對豐度卻降低,這些研究表明這2種菌可能會抑制骨骼發育。血清中的鈣與骨骼中的鈣保持動態平衡,血鈣含量的測定能反映出骨組織的代謝情況[23]。有研究表明地塞米松能夠抑制腸道對鈣的吸收[24]。2種奶粉添加后血清中鈣的含量顯著增加,表明奶粉可以通過增加腸鈣的吸收,從而升高血鈣水平,有助于新骨形成。

低濃度炎癥環境能夠激發細胞外基質和多細胞因子的聚集,調控損傷附近的間充質干細胞向成骨細胞分化,促進骨組織的再生修復[25]。而隨著炎癥反應的加劇和持續,間充質干細胞的活性及成骨分化能力受到抑制[26]。而抗炎細胞因子對破骨細胞生成的有抑制作用,對成骨細胞分化有促進作用。在本研究中,奶粉1顯著增加了抗炎細胞因子含量,奶粉2顯著降低了促炎細胞因子含量。這可能是由于奶粉1中添加了磷脂酰絲氨酸和動物雙歧桿菌Bb-12,奶粉2中添加了乳酸菌粉。有研究表明[27-28],磷脂酰絲氨酸和動物雙歧桿菌作用于機體,可使機體中IL-10含量增加。左玲玲[29]的研究表明,乳酸菌發酵的食物能夠有效地降低機體的IL-6等促炎細胞因子含量。表明這2種奶粉可以通過增加抗炎細胞因子水平,降低促炎細胞因子水平來調節骨骼發育。

近年來,腸道菌群與人類健康和疾病的密切關系受到越來越多的關注,有研究表明腸道菌群可以促進正常骨骼健康和抑制骨質流失[22]。文章分析了各組小鼠糞便中的腸道菌群,主坐標分析和非加權組平均法結果顯示,4組微生物群落出現明顯分離。2種奶粉添加后都降低了由地塞米松引起的腸道菌群紊亂而導致的多樣性增加,改變了群落組成。這與楊茜等[30]的研究結果類似,地塞米松的添加會使小鼠的腸道菌群紊亂,且地塞米松作為碳源和能源促進部分腸道菌群的代謝。此外,奶粉2的添加顯著改變了物種多樣性,這可能與奶粉2中的膳食纖維含量有關。SO等[10]的研究結果表明低聚果糖和低聚半乳糖可有效增加雙歧桿菌和乳酸桿菌的豐度,抑制有害細菌增殖,但對α多樣性沒有明顯影響。PATEL等[11]的研究結果表明低聚異麥芽糖可以促進雙歧桿菌等的增殖。

Firmicutes和Bacteroidota作為腸道菌群的兩大優勢菌門,其平衡在宿主生理活動中起重要作用[31]。有研究表明[32-33],BMD與Firmicutes的比例呈正相關,與Bacteroidota的比例呈負相關。在本研究中,從門水平來看,2種奶粉添加后Firmicutes的比例增加,Bacteroidota的比例降低,這與WANG等[34]的研究結果類似。此外,奶粉1添加后增加了Verrucomicrobiota的比例,Verrucomicrobiota是一種有益細菌,廣泛分布于健康的人體腸道中,可以控制炎癥[35]。從屬水平來看,奶粉1添加后增加了Akkermansia和Alloprevotella的相對豐度,降低了unclassified_Muribaculaceae的相對豐度,這與CHEVALIER等[22]的研究結果一致。LIU等[36]的研究表明,Akkermansia可能含有一些促成骨和抗破骨功能的分子,對骨骼健康產生有益作用。WANG等[37]的研究結果表明,Prevotella可改善破骨細胞的骨吸收,防止骨丟失,促進骨骼發育。奶粉2添加后增加了Lactobacillus和Lachnoclostridium的相對豐度。研究表明[38],Lactobacillusreuteri是一種具有抗炎和骨骼健康特性的益生菌,添加L.reuteri可防止成骨細胞成熟標志物的抑制。Lachnoclostridium被發現是一種可以將乳酸發酵為短鏈脂肪酸的菌株[39],進而通過降低腸道pH值、增加調節性T細胞的分化能力和誘導胰島素樣生長因子-1的產生來調節骨骼發育[40-41]。

4 結論

本研究中2種奶粉都能調節骨骼發育,但調控機制存在差異。奶粉1主要通過改善骨微結構,增加抗炎細胞因子的含量,而奶粉2主要通過提高血清骨轉換速率,降低促炎細胞因子的含量,不同的調節機制可能與奶粉的配方不同有關。在調節腸道菌群方面,奶粉1上調了Akkermansia和Alloprevotella的相對豐度,而奶粉2上調了Lactobacillus和Lachnoclostridium的相對豐度,這些差異可能與不同奶粉配方的獨特組成有關。2種奶粉比較而言,奶粉1能直接促進骨組織和改善骨微結構,具有更直接促進骨骼發育的效果。