云南食用花卉80%甲醇提取物抗氧化活性的比較研究

沈曉靜,周紹琴,王虹,李興玉,黃璐璐,尹田鵬

1(云南農業大學 理學院,云南 昆明,650201)2(云南農業大學 食品科學技術學院,云南 昆明,650201) 3(遵義醫科大學珠海校區 生物工程系,廣東 珠海,519041)

食用花卉是指其根、莖、葉、花等各部位可以直接食用的花卉植物,其既可用于觀賞,也可以食用、入藥[1]。食用花卉作為一種無毒、安全的花卉,其外觀、口感等價值?？捎糜谑称?、醫藥領域[2]。過去,人們常將食用花卉當作填充或調味的元素應用于傳統烹飪中,而對其科學價值研究較少[3]。然而,隨著食用花卉獨特的風味和豐富的活性成分研究的不斷深入,其商業價值也在不斷增加[4]。另外,食用花卉的健康作用和營養價值也引起了研究者的極大興趣[5]。

對于翻譯專業尤其是MTI專業的學生來說，翻譯是一門核心課程，它的目的就在于在扎實的語言基本功基礎上，培養學生的綜合分析能力和創新能力。但是根據以上分析卻顯示，由于傳統的教學過于注重學生翻譯技能的機械訓練，忽視翻譯過程中的思維活動，這才導致了學生思辨能力的喪失。

腫瘤、心血管疾病、糖尿病被認為是人類“三大殺手”。目前認為,自由基損傷與大多數慢性退行性、老年性疾病的發生有關,如心臟病、老年性癡呆、腫瘤等。自由基通過各種不同的途徑參與心臟疾病的發生和發展,因此,抗氧化劑可參與心臟疾病的治療[6-7]?？寡趸瘎┎粌H能控制自由基,還能通過活化或抑制基因來調控細胞增殖,因此,其能有效地預防腫瘤,甚至與其他醫療方法聯用治療腫瘤[8]。糖尿病的發生和發展與機體/組織中因自由基產生增多和(或)抗氧化防御功能損害等引起的氧化應激有關。因此,增強機體或組織的抗氧化能力可降低血糖[9]。此外,氧化/抗氧化失衡是慢性阻塞性肺疾病的重要發生機制之一,有效的抗氧化劑是防治慢性阻塞性肺疾病的重點[10-11]。另外,實踐還證明,抗氧化劑的補充有助于預防中風的發生和改善其已發病癥[12]?？傊?氧化應激與多種疾病相關,開發和尋找有效抗氧化劑是治療這些疾病的重要方式。

食用花卉中含有豐富的天然抗氧化生物活性成分(如酚酸類、黃酮類和花青素[2])。這些抗氧化活性成分對高血糖、癌癥和神經退行性疾病有很大影響[13]。研究還發現,與一些普通蔬菜和水果相比,有的食用花卉的抗氧化能力更強[14]。早在公元前3000年,我國就有將花用于烹飪的習慣。云南具有豐富的植物資源,據統計,云南省常用于食用的花卉就有303種,分屬于74科178屬[15]。通過對部分云南食用花卉的研究發現,這些食用花具有較高的營養和食用價值[16]。然而,目前對云南食用花卉的研究報道是有限的,為進一步開發利用食用花卉資源提供依據,本研究在對采自云南的17種食用花卉提取物中總酚、總黃酮和原花青素含量測定的基礎上,采用DPPH自由基清除實驗和FRAP法對抗氧化能力進行評價,并分析活性成分含量與抗氧化效果的相關性。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

采自云南的17種食用花卉,樣品信息詳見表1,室溫下陰干后粉碎備用。

式中:As,樣品溶液的吸光度;Ao,未加樣品溶液的吸光度。

1.2 設備與儀器

DLSZ-I低溫循環泵、KQ-250DB超聲波清洗機、SHZ-D(Ⅲ)循環水式真空泵,鞏義市予華儀器有限公司;RE-2000B旋轉蒸發儀,上海亞榮生化儀器廠;722型分光光度計、FA2104N電子天平,上海菁華科技有限公司;VFD-3000真空冷凍干燥機,北京博醫康實驗儀器有限公司;旭曼1000Y多功能粉碎機,永康市鉑歐五金制品有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 食用花卉成分提取

采用參考文獻[17]中的提取方法并適當修改,具體方法為:稱取粉碎后的食用花卉樣品25 g,加入200 mL體積分數80%甲醇,50 ℃超聲波30 min后過濾。重復提取1次,合并濾液,50 ℃下旋蒸除去甲醇,凍干。配制成10 mg/mL的原液,冷藏待用。

1.3.2.1 總酚(total phenolic contents, TPC)含量的測定

通過SET k-cover算法找出多個對網絡獨立覆蓋的集合并進行睡眠調度,可以有效地提升網絡的生命期,當前的SET k-cover算法多針對完全覆蓋展開研究,本文提出了一種針對百分比覆蓋的SET k-cover算法,將連通度作為約束條件,以覆蓋和生命期為目標,百分比覆蓋下可以讓更多的節點進入休眠狀態,從而達到節能、抗干擾的目的。實驗結果表明,算法在保證網絡覆蓋質量時能夠有效地減少活躍節點的數量,使得覆蓋集數量增大,延長了網絡的生存時間。受限于連通度的約束,覆蓋百分比的生命期延長效應在覆蓋比率較低的情況下有抑制現象,算法可為需要進行覆蓋比選擇的應用場景提供理論最佳數值的參考依據。

1.3.2 食用花卉活性成分的測定

參考HU等[17]的方法略作修改后測定總酚含量。以沒食子酸為標準品,根據沒食子酸標準曲線計算食用花的總酚含量,結果以mg沒食子酸(GCE)/g提取物(Ex)表示,標準曲線方程:A=0.010 8C+0.000 7(R2=0.997 8,C為沒食子酸質量)。

嚴和平等[22]采用乙醇熱提取法對云南省紅河州13種食用花進行了總酚和總黃酮含量的測定,結果發現總黃酮含量最高3種食用花卉為桂花、密蒙花、棠梨花;最低的3種為菊花、金雀花和苦刺花?？偡雍孔罡叩?種食用花卉為石榴花、桂花和棠梨花;最低的3種則為金雀花、馬?；ê涂啻袒?。本研究采用采集于曲靖的棠梨花80%甲醇提取后,其總黃酮和總酚含量也在17種食用花中均為最高。采集于賓川的石榴花具有高含量的總酚;采集于昭通的密蒙花也富含黃酮類成分。同樣的,金雀花和白刺花中總酚和總黃酮含量較低。

1.3.3 食用花卉抗氧化活性的測定

利用Excel 2017軟件統計患者的基本信息和伏立康唑片的臨床用藥情況。參照各侵襲性真菌?。╥nvasive fungal disease，IFD）診療“指南”[3-5]、伏立康唑片說明書[6]、《新編藥物學》[7]、《中國醫師藥師臨床用藥指南》[2]等，評價伏立康唑片在腎臟科用藥的合理性。

1.3.2.3 原花青素(total procyanidin contents, TPYC)含量的測定

采用參考文獻[19]的方法測定。以兒茶素為標準品,根據兒茶素標準曲線計算食用花中糖含量,結果以mg兒茶素(CE)/g提取物(Ex)來表示,標準曲線方程:A=2.477 1C-0.003 2(R2=0.998 9,C為兒茶素的質量)。每個樣品重復3次,結果以平均值表示。

參考HE等[18]的方法測定總黃酮含量。以蘆丁作為標準品,根據蘆丁標準曲線計算食用花的總黃酮含量,結果以mg蘆丁(RE)/g提取物(Ex)表示,標準曲線方程:A=0.879C-0.001 4(R2=0.999 4,C為蘆丁質量)。

1.3.3.1 DPPH自由基清除實驗

按照參考文獻[20]的方法進行DPPH自由基清除實驗。以蘆丁為陽性對照,樣品的DPPH抗氧化活性以50%抑制率(IC50)表示,DPPH自由基清除率的計算如公式(1)所示:

DPPH自由基清除率/%=[(Ao-As)/Ao]×100

觀光農業作為新興的行業，既能促進傳統農業向現代農業轉型，解決農業發展的部分問題，也能提供大量的就業機會，為農村剩余勞動力解決就業問題，還能夠帶動農村教育、衛生、交通的發展，改變農村面貌，是為解決中國“三農問題”提供新的思路。墾區具有良好的國土資源條件和農業生態環境，森林及動植物資源豐富多彩，保存有傳統而古樸的民風民俗，同時具有明顯的地緣優勢，因此應因地制宜，突出自身資源特色，確定符合本地實際的發展對策，集中力量建設一批能代表黑龍江墾區地方特色、競爭力強、配套完善的大型觀光農業旅游產品。

(1)

蘆丁、DPPH、2,4,6-三吡啶基三嗪(2, 4, 6-tripyridyl triazine,TPTZ),上海瑞永生物科技有限公司;福林酚,國藥集團化學試劑有限公司;葡萄糖,天津市盛奧化學試劑有限公司;Na2CO3、KH2PO4、FeCl3·6H2O、FeSO4·7H2O、亞硝酸鈉,西隴科學股份有限公司;AlCl3,天津市風船化學試劑科技有限公司;沒食子酸,天津市科密歐化學試劑有限公司;以上試劑均為分析純。

汶上縣核桃栽培歷史悠久，縣域內土壤、氣候、水利等諸項自然因子均適宜核桃產業的發展，北部山區為低山丘陵，土壤以褐土、棕壤為主，土層較厚，質地疏松，ph值介于6.7—7.5之間，是核桃生長的適生區和豐產區，歷史上北部山區的梅山核桃溝、寨子山核桃嶺遠近聞名。近年來，汶上縣堅持把發展核桃產業作為改善生態環境、優化產業結構、增加民生福祉的重要內容，出臺了一系列扶持核桃發展的政策措施，核桃產業得到快速發展，全縣核桃栽植面積達到7.2萬畝，總產值達2.55億元，多次在中國核桃節、中國林產品交易會上榮獲金獎，先后被評為山東省核桃產業示范縣、中國核桃之鄉、中國核桃名縣。

1.3.3.2 FRAP法

其實，他哪里知道我的心意。我是他想象中的那種狗男人嗎？他錯了，確確實實錯了。我是喜歡他母親那樣的女人，但僅僅是尊重，卻絕沒有要欺辱他們母子的絲毫惡意。他一定是聽信了某些人的閑言碎語。這世界的人真是都他媽的把眼裝在了屁股上了。他們壓根就不喜歡你去做一丁點兒有利于別人的好事。我想幫助小六子母子做點事，這難道有什么不對嗎？去他媽的那些狗日的爛舌頭！

表1 云南食用花卉樣品信息Table 1 Edible flowers samples from Yunnan province

續表1

1.4 數據分析

所有實驗數據均測定3次,以平均值±標準偏差表示。運用SPSS 18.0軟件進行相關性分析(相關系數為Pearson)。

2 結果與分析

2.1 食用花卉活性成分含量的分析

酚類、黃酮類和原花青素類化合物作為有效的抗氧化活性成分,具有顯著的自由基清除能力。為了區分不同食用花卉中主要有效成分,根據17種食用花卉的成分含量測定結果進行熱圖分析,結果如圖1所示。

結果表明,總酚含量最高的為棠梨花,其次是石榴花,含量分別為(229.00±1.67) mg GCE/g Ex和(216.41±2.41) mg GCE/g Ex;最低的食用花則為金雀花和三七花,含量分別為(25.36±3.15) mg GCE/g Ex和(13.64±1.67) mg GCE/g Ex?？傸S酮含量則以棠梨花和密蒙花最高,分別為(586.20±22.75)RE/g Ex和(442.32±52.33) RE/g Ex;最少的為白刺花和木棉花,含量分別僅為(16.40±0.40) mg RE/g Ex和(14.91±0.51) mg RE/g Ex。此外,棕櫚花和木棉花中原花青素含量達(295±5.00) mg CE/g Ex和(244.33±4.00) mg CE/g Ex。三七花則最低,僅為(3.50±0.50) mg CE/g Ex,白刺花也僅含(5.33±0.30) mg CE/g Ex。

按照參考文獻[21]的方法進行FRAP抗氧化能力測定。蘆丁為陽性對照,以FeSO4為標準品,根據標準曲線A=0.632 5C(R2=0.999 2),計算還原能力,樣品的FRAP法抗氧化活性表示為mmol FeSO4/g提取物。

1.3.2.2 總黃酮(total flavonoid contents, TFC)含量的測定

圖1 不同食用花卉成分含量的熱圖和聚類分析Fig.1 Heat map and cluster analysis of the main active ingredient contents of different edible flowers

根據上述結果,發現棠梨花、棕櫚花、密蒙花富含黃酮類活性成分;棠梨花、石榴花、棕櫚花富含多酚類成分;木棉花、棕櫚花和棠梨花富含原花青素。因此,棠梨花、棕櫚花、石榴花、密蒙花、木棉花活性成分較為豐富。根據圖1,將17種食用花卉分為了2個主集群和3個子集群。在主簇Ⅰ中,包含棕櫚花、棠梨花和密蒙花3種食用花卉。另外14種食用花卉組成主簇Ⅱ,該主簇包含2個子簇,其中木棉花、大白杜鵑花和地涌金蓮3種食用花為同一亞簇,其余11種食用花卉則組成另一個子簇。此外,豆科屬金雀花、白刺花和槐花3種豆科食用花卉同屬一個亞簇。

2.2 食用花卉抗氧化活性的分析

為了區分不同食用花卉的抗氧化活性,根據17種食用花卉的抗氧化測定結果進行熱圖分析,結果如圖2所示。DPPH自由基清除實驗是一種靈敏、有效的評價抗氧化能力的方法,根據DPPH自由基實驗結果發現,石榴花具有最強的DPPH自由基清除能力,其IC50值達(0.22±0.007) mg/mL,其次為棕櫚花,清除能力分別為(0.42±0.041) mg/mL。白刺花和三七花2種食用花的DPPH自由基清除能力最弱,IC50值分別為(20.96±0.92) mg/mL和(16.56±0.26)mg/mL。

圖2 不同食用花卉抗氧化能力的熱圖和聚類分析Fig.2 Heat map and cluster analysis of the antioxidant activity from different edible flowers Yunnan

FRAP法是通過將Fe3+-TPTZ還原為Fe2+-TPTZ的方式評價抗氧化能力。結果顯示,棠梨花具有最強的鐵還原能力,達(2.94±0.32) mmol Fe2+/g Ex;石榴花次之,為(2.91±0.20) mmol Fe2+/g Ex。另外,茉莉花、三七花和白刺花最弱,分別為(0.022±0.017)、(0.063±0.027)、(0.065±0.012) mmol Fe2+/g Ex。

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(OSAHS)是臨床常見的睡眠呼吸障礙性疾病。有報研究指出OSAHS與人類心血管疾病的發生具有有較密切的關系,臨床可導致高血壓、冠心病等心血管系統疾病的發生[2]。

另外,根據17種食用花卉的抗氧化活性測定結果對其進行熱圖分析,結果顯示17種食用花分為了2個主集群和3個子集群。具有最弱抗氧化能力的白刺花和三七花為同一主群。15種食用花卉構成了主簇Ⅱ,并分成了2個子簇,其中槐花、雞蛋花、金雀花和南瓜花為同一子群,棠梨花和石榴花構成一個子群;其余9種食用花卉則構成另一個子群,并又可分為4個不同的群。

2.3 食用花卉成分與抗氧化活性的相關性分析

為了進一步分析17種食用花卉成分與抗氧化活性之間的關系,采用Pearson進行相關性分析,結果如圖3所示。通常,相關性系數為0.8～1.0時,認為顯著相關性極強,相關性系數越接近于1相關性越強;相關性系數為0.0～0.2時,則認為相關較弱或不相關。因此,根據相關性分析結果表明,DPPH自由基清除能力和FRAP抗氧化能力與總酚、原花青素含量正相關。其中,總酚含量與FRAP法抗氧化能力相關性最強,達到0.95?？傸S酮則與抗氧化活性呈弱相關,甚至不相關。

圖3 不同食用花卉活性成分與抗氧化能力之間的 相關性分析Fig.3 The correlation between main ingredient contents and antioxidant activity of different edible flowers 注:*表示P<0.05;**表示P<0.01。

飲食對壽命和衰老產生重要的影響。因此,開發和利用具有潛在抗衰老作用的資源十分重要[23]。研究已證實,花卉具有潛在的抗衰老作用?？寡趸c抗衰老之間存在著密切的關系。食品的抗氧化性被認為是評價食品營養與功能的重要參數之一[24-25]。食用花卉作為天然活性成分和抗氧化活性的物質的重要來源,對進一步開發和利用花卉資源和尋求天然活性物質具有重要的作用[23,26]。通過研究發現,棠梨花和石榴花不僅總酚、總黃酮含量高,而且具有較強的DPPH自由基清除能力和鐵還原能力。這些食用花卉具有進一步深入研究和開發的重要潛質。例如,可利用食用花卉對抗氧化應激的效力,用于相關慢性疾病的食療。因此,食用花卉作為生物活性化合物的潛在來源,在人類飲食中有廣闊的應用前景。

對注冊數據統計發現，注冊在藥品零售企業的執業藥師變更注冊的情況較為頻繁，主要有兩種情況：一是執業藥師變動率（指變更注冊和再次注冊中執業單位發生變更的人數之和與全部注冊人數的占比）較大；二是變動頻次較高。在2011年全年，執業藥師變動率接近35%，變動頻次也較高，有些執業藥師1年內要變更2～3個執業單位[10]。尤其是發生變動后，部分企業不再補充執業藥師，原執業單位出現執業藥師空缺。因此，執業藥師變動后的補充是問題的關鍵，只有掌握補充情況才能在管理上采取相應對策。所以，我們從2011年開始統計執業藥師變動及補充情況，并進行分析。

償債能力分析，是指對企業償還各種債務的能力和保障程度所作的分析，通過這種分析可以有效地揭示出企業存在的財務風險。分析和評價企業短期償債能力的財務指標主要有流動比率、速動比率等。

3 結語

本文通過對采自云南不同地區的17種食用花卉進行活性成分及其抗氧化性能的比較,發現這些食用花卉含有一定的酚類、黃酮類等成分,且呈現出了一定的抗氧化性,可以作為天然抗氧化劑的來源在日常飲食中發揮其食用價值。鑒于,云南具有豐富的食用花卉資源,目前對其深入的研究報道較少,為了進一步地開發和利用這些豐富的資源,充分利用其有效成分及提升其價值,對其進行必要的成分和活性功能的深入研究是非常重要的。