鮮牛奶中抗生素殘留的原因及常用檢測方法

張麗茹 黃新紅 張東麗 李治玲 謝春勝

摘要：抗生素是一種高效的獸藥，在奶牛養殖業中經常用于治療乳房炎等疾病，但如果使用不當就會導致牛奶中殘留過多。鮮牛奶中殘留抗生素可能會引起多種不良反應，其會造成對抗生素類藥物的敏感性降低，提高病原菌的耐藥性?，F主要概述鮮牛奶中抗生素殘留的原因以及常用檢測方法，給大家提供一定參考。

關鍵詞：鮮牛奶；抗生素殘留；原因分析；氯化三苯基四氮唑法；免疫受體試驗方法

中圖分類號：S858

文獻標識碼：B

文章編號：2095-9737（2018）01-0109-01

1 原因分析

新陳代謝和藥物代謝動力學。藥物能夠經由不同的被動或者主動的化學過程而轉運到動物體內，在機體新陳代謝過程中，部分藥物能夠表現出治療學或者產生毒性影響，但其他的卻沒有。只要開始藥物治療，在其通過不同途徑代謝結束前，會持續向組織間隔擴散。因此抗生素采取一般給藥途徑都會經由不同途徑在一定程度上被消除，如奶液、糞便、尿液以及唾液（反芻動物中多次被利用的胃液）。另外，藥物的制劑形式在很大程度上影響奶牛體內分子的排出，如某些“長期效應”藥物能夠在很長一段時間保留在注射部位和器官處，同時也會長時間對微生物有效。

哺乳期乳房處理及殘留物的持續。奶牛哺乳期發生乳房炎后主要通過兩種不同的處理機制進行治療，即物理機制，是指每次擠奶中機械的排除；生物機制，即經由空隙進入血液中。少數抗生素本身就具有非常高的擴散性，能夠快速越過如細胞壁、血管壁等不同的物理障礙，從而進入血液循環，再通過新陳代謝以不同的渠道消除掉，但其還能夠在乳腺組織中積聚，并在葡萄腺、乳房池以及乳頭內存留，就會在擠奶時經由奶液排到體外。通常情況下，牛奶中殘留的抗生素濃度需要2～5天才會降低到MRL水平。

干乳期乳房處理。奶牛干乳期需要采取非常特殊的處理方式，這是由于該階段機體停止產奶，而在最初哺乳期的生理恢復過程中，藥物制劑的形式以及自身特性都會明顯影響干乳期處理。在不擠奶的情況下，有時奶牛治療后在乳頭中殘留的抗生素可能持續2個月之久，最終在第一次擠奶時就會經由初乳排出。

2 常用檢測方法

氯化三苯基四氮唑法。即TTC法，在我國作為檢測鮮牛奶中抗生素殘留的標準方法，其測定原理是在鮮牛奶中加入菌種（嗜熱鏈球菌），經培養后再加入無色的TTC指示劑，觀察顏色變化。當鮮牛奶中存在抗生素時，加入菌種后無法增殖，此時就不會促使TTC指示劑發生還原反應，從而依舊呈無色狀態；當鮮牛奶中存在抗生素時，加入菌種后就會大量生長繁殖，由于其在新陳代謝過程中會生成大量的氫，導致TTC指示劑發生還原反應而生成還原型的TTC，此時指示劑變成紅色，從而造成樣品也被染成紅色。也就是說，鮮牛奶顏色沒有變化判為陽性，染成紅色判為陰性。操作時，先活化菌種，即用接種環取嗜熱鏈球菌菌種在9 mL滅菌脫脂乳中接種，放在36℃恒溫培養箱中進行12～15 h培養，之后保存在2～5℃冰箱中備用。注意每15天進行1次轉種。第二步是測試菌液，即將上述被活化的嗜熱鏈球菌菌種在滅菌脫脂乳中接種，在36℃添加下進行15 h培養，接著添加相同體積的滅菌脫脂乳，充分混勻即制成稀釋的測試菌液。第三步是樣品培養，即取9 mL樣品裝入18 mm×180 mm的試管內，注意每份樣品還需要另外設置一份平行樣。同時，還要再各做l份陽性和陰性對照，其中陰性對照管添加滅菌脫脂乳9 mL，陽性對照管添加青霉素G參照溶液9 mL。全部試管放在80℃水浴箱中進行5 min加熱，經過冷卻低于37℃時再添加1 mL測試菌液，輕輕轉動試管充分混勻。之后放在36℃水浴箱中進行2h培養，接著添加3 mL質量分數為4%的TTC水溶液，使用渦旋混勻器進行15 s混合均勻或者振動試管混勻。最后再放在36℃水浴箱內進行30 min培養，注意避光，即可觀察顏色變化。若樣品顏色沒有發生變化，可繼續在水浴中進行30 min的避光培養，然后用于最終觀察。觀察時要確保迅速，如果長時間避光就會造成干擾。

免疫受體試驗方法。免疫受體檢測法是ELISA（酶聯免疫分析法）的一種變換形式，其基本原理是以特定抗生素類群（如β-內酞胺類）作為靶子，讓某些部位上固定的廣譜受體（如微生物細胞）或者特定抗體捕捉。大部分檢測法都是根據競爭性原理，使樣品內所含的抗生素與內置抗生素標志物相互競爭結合于廣譜受體或者固定抗體，之后采取沖洗和顯色處理。內置抗生素標志物同廣譜受體或者固定抗體相互結合會形成的一種復合體，在酶的作用下發生分解，從而生成發光物質或者有色物質。鮮牛奶中殘留的抗生素同廣譜受體或者固定抗體結合后也會形成復合體，但在酶的作用下分解不能夠生成發光物質或者有色物質。因此通過對光度或者色度進行測定，同時與參比物進行對照，由此判斷結果呈陽性還是陰性。由于該法根據競爭性原理，如果最終的反應結果光度越強或者顏色越深就判斷為陰性，反之就判斷為陽性。這種檢測方法的優點是速度快，一般在10 min內就能夠得到結果，但通常只能夠作為定性試驗，具有很強的特異性，且檢測費用相對較高。