共轉染
- 長鏈非編碼RNA PCAT19對胰腺癌細胞增殖與侵襲的影響及其作用機制
PCAT19（共轉染組），并分成si-PCAT19組、si-NC組及共轉染組，待各組細胞系培養至對數期后行后續實驗。1.3 RNA提取和qRT-PCR使用TRIzol 試劑從細胞系中提取總RNA。用逆轉錄酶將分離的RNA轉錄成互補DNA（cDNA）。使用 SYBR Green實時聚合酶鏈式反應擴增成cDNA產物。使用 SYBR Green RT-PCR檢測PCAT19及miR-195-5p的表達。PCAT19的表達以GAPDH為內參，標準化為GAPDH的對
中國普通外科雜志 2023年9期2023-11-02
- lncRNA SNHG1靶向miR-145-5p/PDCD4軸對缺氧/復氧誘導的心肌細胞凋亡的影響
5pmimic共轉染于H9c2細胞，48 h后觀察熒光素酶活性變化。分別構建PDCD4野生型質粒 （PDCD4-WT） 和突變型質粒 （PDCD4-MUT），將PDCD4-WT和PDCD4-MUT分別與mimic NC或miR-145-5pmimic共轉染于H9c2細胞，48 h后觀察熒光素酶活性變化。1.3 統計學分析采用SPSS 22.0軟件處理數據。計量資料以x-±s表示，多組數據的比較采用單因素方差分析，進一步2組數據的比較采用SNK-q檢驗。P<
中國醫科大學學報 2023年10期2023-11-01
- LncRNA NORAD通過miR-199a-3p調控ZNF217對非小細胞肺癌細胞增殖、凋亡及化療敏感性的影響
or NC組（共轉染si-NORAD和inhibitor NC）、si-NORAD+miR-199a-3p inhibitor組（共轉染si-NORAD和miR-199a-3p inhibitor），各組加入2 μg/mL的DDP處理24 h，進行后續實驗。1.6 CCK-8法檢測細胞增殖 將各組H460/DDP細胞接種于96孔板中，按照1.5中分組處理，培養48 h，每孔各加入10 μL CCK-8溶液，37oC孵育30 min，酶標儀測量各孔的吸光度（
中國肺癌雜志 2023年7期2023-09-04
- lncRNA HCG18靶向miR-34b-5p/FOXP1軸促進骨肉瘤細胞增殖、遷移和侵襲的機制研究
b-5p組)、共轉染si-HCG18與anti-miR-NC(si-HCG18+anti-miR-NC組)、si-HCG18與anti-miR-34b-5p(si-HCG18+anti-miR-34b-5p組)、miR-34b-5p mimics與pcDNA(miR-34b-5p+pcDNA組)、miR-34b-5p mimics與pcDNA-FOXP1(miR-34b-5p+pcDNA-FOXP1組)。轉染12 h后,更換為含10% FBS的RPMI 1
蚌埠醫學院學報 2023年6期2023-08-02
- LncRNA XIST調節miR-545-3p/SMAD5軸對人成骨細胞增殖、遷移及成骨分化的影響
和miR-NC共轉染)、pcDNA-XIST+ miR-545-3p mimic組(pcDNA3.1-XIST和 miR-545-3p mimic共轉染)。對hOB細胞先進行上述轉染24 h,再在分化培養基中進行誘導分化培養7 d,然后進行后續實驗。1.5 qRT-PCR檢測XIST、miR-545-3p表達 使用Trizol試劑提取細胞中的總RNA,將RNA逆轉錄為cDNA后,以cDNA為模板進行熒光定量PCR擴增。分別以GAPDH、U6為內參,使用2-
河北醫藥 2023年4期2023-04-08
- LINC00342調控miR-384對肺鱗癌細胞增殖侵襲遷移的影響研究
itor-NC共轉染)、si-LINC00342+ miR-384 inhibitor組(si-LINC00342和 miR-384 inhibitor共轉染)。轉染嚴格按照LipofectamineTM2000 Transfection Reagent操作步驟進行。1.3.3RT-qPCR法檢測LINC00342、miR-384表達：使用Trizol提取各組細胞中的總RNA，將RNA逆轉錄為cDNA后，以cDNA為模板上RT-qPCR儀進行擴增。LINC
河北醫學 2023年2期2023-03-13
- circ-BRWD1靶向調控作用miR-132-3p介導FOXO1成骨
-132-3p共轉染入BMSCs后檢測FOXO1的表達水平：RT-qPCR分析檢測control、agomiR-NC、agomiR-132-3p、agomiR-132-3p+pcDNA3.1、agomiR-132-3p+pc-circ-BRWD1轉染的BMSCs細胞中FOXO1的相對表達。將pc-circ-BRWD1與agomiR-132-3p或sh-FOXO1共轉染BMSCs后檢測特異性成骨分化相關因子Runx2的表達水平：RT-qPCR檢測在contr
醫學理論與實踐 2023年2期2023-02-04
- 長鏈非編碼RNA(LncRNA)母系表達基因3(MEG3)對糖尿病視網膜病變大鼠模型視網膜血管內皮細胞凋亡的影響△
gomir組、共轉染組、共轉染陰性對照組，每組分配12只大鼠，再取12只大鼠按照10 mL·kg-1劑量自腹腔注入0.1 mol·L-1檸檬酸緩沖液，作為對照組。1.2.2 大鼠分組給藥及視網膜血管通透性檢測參照文獻[11] 給予大鼠藥物：LncRNA MEG3過表達組大鼠玻璃體內注射LncRNA MEG3過表達質粒(濃度參照說明書設定)；miR-145-5p agomir組大鼠玻璃體內注射miR-145-5p agomir(濃度參照說明書設定)；共轉染組
眼科新進展 2023年1期2023-02-01
- 缺氧誘導因子-1α、Notch1和Jagged1共轉染對急性心肌梗死模型大鼠心功能的改善作用
鼠分為模型組、共轉染組和對照組，每組10只。①模型組：通過腹腔注射40 mg/kg 1%戊巴比妥鈉對大鼠進行麻醉。氣管插管后，所有大鼠使用小動物呼吸機接受正壓有氧通氣，并在左側第4肋間打開胸部，切開心包后將心臟外化。使用6-0絲線縫合冠狀動脈左前降支，距主動脈根部約3～5 mm。通過梗死區域的局部發紺驗證AMI模型的制備成功。②共轉染組：在冠狀動脈左前降支結扎過程中將HIF-1α、Notch1、Jagged1共轉染慢病毒注射到大鼠心臟的胸前組織中，即在梗死
陜西醫學雜志 2022年11期2022-11-11
- lncRNA FOXD2-AS1對類風濕關節炎滑膜成纖維細胞增殖和凋亡的機制研究
位點（表3）。共轉染 WT-lncRNA FOXD2-AS1+miR-331-3p mimics的細胞熒光素酶活性較共轉染WT-lncRNA FOXD2-AS1+miR-NC的 細 胞 低（0.46±0.03 vs 1.00±0.08，t=18.961，P＜0.05），而共轉染 MUT-lncRNA FOXD2-AS1+miR-331-3p mimics的細胞熒光素酶活性與共轉染MUT-lncRNA FOXD2-AS1+miR-NC的細胞差異無統計學意義（
現代實用醫學 2022年8期2022-10-10
- 動脈炎病毒PRRSV和EAV的Nsp4蛋白對mTANK蛋白的降解
NK-HA質粒共轉染HEK293T細胞，轉染24 h后收取細胞裂解液，于4 ℃、12 000×g離心10 min，取上清加入1 μg小鼠IgG和20 μL Protein A+G，于4 ℃緩慢搖晃4 h，去除非特異性吸附.于4 ℃、1 000×g離心5 min，取上清加入1 μg Flag單抗，于4 ℃緩慢搖晃12 h，加入40 μL蛋白A+G繼續搖晃4 h，于4 ℃、1 000×g離心5 min，棄上清，用預冷的PBS洗滌3次，最后用100 μL PBS
福建農林大學學報（自然科學版） 2022年5期2022-10-08
- 非洲豬瘟病毒MGF360-14L靶向MAVS抑制Ⅰ型干擾素的產生
MAVS或空載共轉染。轉染24 h后收集細胞，進行雙熒光素酶檢測，具體操作步驟參見雙熒光素酶說明書(北京全式金生物技術股份有限公司)。1.2.3 免疫共沉淀試驗(Co-IP) HEK293T細胞傳代培養于6孔細胞培養板中，待細胞密度達到70%左右，依據具體試驗轉染p3×Flag-MGF360-14L、p-CMV-eGFP-MGF360-14L、pcDNA3.1-Myc-TRIM21、pcDNA3.1-HA-MAVS、p3×Flag-MAVS、pCDEF-H
畜牧獸醫學報 2022年9期2022-09-30
- lncRNA SNHG6通過microRNA-26b-5p對三陰性乳腺癌細胞增殖、遷移、侵襲的作用機制研究*
-5p抑制組、共轉染組。對照組采用空載質粒進行轉染，SNHG6 敲減組采用si-SNHG6 慢病毒載體進行轉染，miR-26b-5p 抑制組采用空載質粒及miR-26b-5p-inhibitor 進行轉染，共轉染組同時采用si-SNHG6慢病毒載體及miR-26b-5p-inhibitor 進行轉染。1.5 方法1.5.1 細胞轉染轉染過程按照Lipofectamine 2000 試劑盒說明書進行操作，參照細胞分組的干預內容進行轉染，于二氧化碳培養箱中培養
中國現代醫學雜志 2022年16期2022-08-31
- 長鏈非編碼RNA ENST00000415964調控miR-214/DKK3對急性白血病細胞增殖、凋亡的影響
iR-NC組(共轉染pcDNA3.1-ENST-00000415964和miR-NC)，pcDNA3.1-ENST00000-415964+miR-214組(共轉染pcDNA3.1-ENST00-000415964和miR-214)，pcDNA3.1-ENST00000415-964+si-NC組(共轉染pcDNA3.1-ENST00000415964和si-NC)，pcDNA3.1-ENST00000415964+si-DKK3組(共轉染pcDNA3.1
中國老年學雜志 2022年8期2022-07-25
- miR-498靶向磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1對口腔鱗狀細胞癌細胞生長的影響
和OE-NC 共轉染細胞）、miR-NC+OE-PCK1 組（miR-NC 和OE-PCK1 共轉染細胞）、miR-498 mimics+OE-NC 組（miR-498mimics 和OENC 共轉染細胞）、miR-498 mimics+OE-PCK1 組（miR-498 mimics 和OE-PCK1 共轉染細胞）、antimiR-NC+si-NC 組（anti-miR-NC 和si-NC 組共轉染細胞）、anti-miR-NC+si-PCK1 組（an
實用醫學雜志 2022年11期2022-07-18
- miR-133a-3p靶向BMP9調控人頜骨骨髓間充質干細胞增殖、分化和凋亡的研究
i-con組（共轉染anti-miR-133a-3p和si-con后進行成骨誘導）、anti-miR-133a-3p＋si-BMP9組（共轉染anti-miR-133a-3p和si-BMP9后進行成骨誘導）。1.2.3 RT-qPCR檢測成骨分化過程中miR-133a-3p和BMP9 mRNA的表達 收集成骨誘導7 d的hOBMSCs，采用Trizol法提取hOBMSCs總RNA，以紫外分光光度計測定總RNA的純度。按cDNA第一鏈合成試劑盒、SYBR G
實用口腔醫學雜志 2022年2期2022-05-05
- lncRNA HOTAIRM1與miR-125b對肝細胞癌生物學行為影響
或miR-NC共轉染。將重組載體與miR-NC或miR-125b模擬物共轉染HEK293 細胞。共轉染48 h后，棄掉原培養基，用100 μL PBS洗滌培養孔1遍，吸盡剩余的PBS；使用去離子水將5×PLB稀釋成l×PLB；向96孔板中加入50 μL 1×PLB，裂解細胞15 min；96孔酶標板中(白色不透光的)每孔加上步驟的上清液10 μL，再加入100 μL LARII，靜止2 s；每孔加入Stop&Glo Reagent終止反應，靜止2 s后，進
錦州醫科大學學報 2022年1期2022-03-30
- EIAV Rev 核輸出活性檢測系統的建立
DDV-HA）共轉染HEK293T 細胞，利用western blot 在細胞裂解液中可檢測到Gag 的表達，通過檢測Gag 的表達來評估Rev 的核輸出活性。1 材料與方法1.1 質粒、菌株和細胞pLGFD3-8、pcDNA-HA、pcDNA-RevFDDV-HA、pEGFP-N1 質粒、HEK293T 細胞均由本實驗室保存；pcDNA-RevL36A-HA 是在pcDNARevFDDV-HA 的基礎上獲得的L36A 突變質粒；pcDNARevUK-HA
中國預防獸醫學報 2022年1期2022-03-22
- circ_0091581靶向miR-136對皮膚鱗狀細胞癌細胞生物學行為的影響
miR-NC(共轉染)、si-circ_0091581與anti-miR-136(共轉染)分別轉染至融合至70%的SCL-1細胞，分別記為si-NC組、si-circ_0091581組、miR-NC組、miR-136組、si-circ_0091581+anti-miR-NC組、si-circ_0091581+anti-miR-136組。1.2.2qRT-PCR檢測基因的表達水平CSCC組織、癌旁組織與各組SCL-1細胞的總RNA通過Trizol試劑提取，反
醫學研究生學報 2022年12期2022-02-02
- LncRNA H19通過miR-370-3p/RAF1軸對腦膠質瘤T98G細胞增殖侵襲和放療敏感性的影響及機制
：T98G細胞共轉染2μg H19 wt質粒和miR-370-3p mimics；mimics NC+H19 wt組：T98G細胞共轉染2μg H19 wt質粒和mimics NC；H19 mut+miR-370-3p mimics組：T98G細胞共轉染2μg H19 mut質粒和miR-370-3p mimics；mimics NC+H19 mut組：T98G細胞共轉染2μg H19 mut質粒和mimics NC；③inhibitor NC組：T98G
河北醫學 2021年12期2022-01-04
- circ_0084927靶向miR-623調控喉癌TU177細胞增殖和凋亡的機制研究
0084927共轉染TU177細胞，孵育48 h后用雙熒光素酶檢測系統檢測熒光素酶活性。實驗重復3次。將螢火蟲熒光素酶活性歸一化為海腎熒光素酶活性表示相對熒光素酶活性。2 結果2.1circ_0084927和miR-623在喉癌組織中的表達 與癌旁組織比較，喉癌組織中circ_0084927相對表達水平升高，miR-623相對表達水平降低(P表1 喉癌組織和癌旁組織circ_0084927和miR-623的表達水平比較2.2干擾circ_0084927表達
解放軍醫藥雜志 2021年12期2022-01-03
- miR-206靶向FAM83A影響Wnt/β-catenin通路調控胰腺癌放療敏感性
pcDNA組(共轉染miR-206 mimics和陰性對照pcDNA)、miR-206+FAM83A組(共轉染miR-206 mimics和過表達FAM83A質粒pcDNA FAM83A)。1.3qPCR實驗 使用Trizol提取細胞中總RNA，通過cDNA合成試劑盒將RNA樣本轉變為cDNA。以GAPDH為內參，2-ΔΔCt法計算miR-206/FAM83A mRNA的相對表達水平。其中，miR-206的上游引物為5′-CAGATCCGATTGGAATG
中國老年學雜志 2021年23期2021-12-08
- GAS5靶向miR-222-3p對牙周膜干細胞成骨分化的影響機制
iR-NC組：共轉染GAS5-siRNA和antimiR-NC；GAS5-siRNA+antimiR-222-3p組：共轉染GAS5-siRNA和antimiR-222-3p，其中，每組設3 個復孔。將hPDLSCs接種至6 孔板，培養至70%匯合度時，按照脂質體3000說明書對hPDLSCs進行瞬時轉染；轉染6 h后換液，培養48 h收集各組細胞，RT-PCR檢測GAS5和miR-223-3p表達水平評價轉染效率后，再以成骨誘導液培養。1.4 茜素紅染色
實用口腔醫學雜志 2021年2期2021-04-27
- LncRNA-MEG3和KLF4在鼻咽癌發生發展中的作用及可能機制
模擬或陰性對照共轉染C666-1細胞，36 h后雙熒光素酶報告分析系統（Promega公司，美國）分析螢火蟲和雷尼拉信號。熒光素酶活性用微量平板閱讀器定量。1.7 Western blot法檢測蛋白表達用RIPA緩沖液分離總蛋白、10%SDS-PAGE分離并轉移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上，蛋白質定量分析采用Bradford法，用皮爾斯ECL試劑盒顯示PVDF膜上的靶蛋白條帶?？贵w稀釋如下：抗KLF（1:1000）、抗Bcl-2（1:1000）和抗bax
腫瘤防治研究 2021年3期2021-04-12
- 過表達蛋白合成與分泌相關蛋白提高CHO細胞anti- hLAG3產量
G3的抗體質粒共轉染入ExpiCHO- S細胞中，檢測轉染后72 h培養物上清中抗體產量的變化。僅轉染了pCAG- Hygro- IRES2- EGFP載體和anti- hLAG3輕重鏈的細胞上清中抗體的產量為24.21 μg/mL。為了更直觀地體現各蛋白對ExpiCHO- S細胞生產anti- hLAG3的影響，將轉染了各蛋白表達載體的細胞上清的抗體產量用相對產量(Cr)表示(式(2))。Cr=Cm/24.21×100%(2)式中，Cm為實測產量(μg/
北京化工大學學報（自然科學版） 2021年1期2021-04-06
- 長鏈非編碼RNA-ATB對瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖和凋亡的影響及其機制研究
tors 組、共轉染sh-ATB+miR-200c inhibitors 組、共轉染o/e-ATB+miR-200c inhibitors 組、共轉染miR-200c inhibitors+sh-DNMT3B 組、共轉染miR-200c mimics+sh-DNMT3B 組。1.3.2 qRT-PCR采用miRNeasy Mini Kit 提取miRNA，使用TaqMan MicroRNA Assay 試劑盒檢測miR-200c 的相對表達量，并使用App
中國現代醫學雜志 2021年4期2021-03-16
- MEK5α 和MEK5β 調控Beclin 1 啟動子
與p-354 共轉染至C2C12細胞.雙熒光素酶報告基因檢測實驗結果顯示,MEK5αCA 顯著上調熒光素酶活性,而MEK5αDN 顯著下調熒光素酶活性(見圖2(a)),表明MEK5α能夠正向調控Beclin 1 啟動子活性.然后分別轉染不同量的MEK5αCA,結果表明少量MEK5αCA(0.3 μg)對Beclin 1啟動子活性無顯著作用,中量MEK5αCA(0.8 μg)可顯著上調Beclin 1 啟動子活性,而多量MEK5αCA(2.4 μg)可進一步
上海大學學報（自然科學版） 2021年3期2021-03-01
- LncRNA UCA1靶向miR-206/CLOCK對神經膠質瘤細胞生長和侵襲的影響
W1783細胞共轉染慢病毒質粒，與LncRNA UCA1序列shRNA一同構建。LV-con為對照組。將慢病毒載體加入LncRNA UCA1片段構建LV-LncRNA UCA1。miR-206模擬或陰性對照(NC)通過Lipo- fectamine 2000(Invitrogen，美國)進行轉染。1.2.4蛋白質印跡法 通過10%十二烷基硫酸鈉凝膠電泳提取蛋白質，并轉移至聚偏氟乙烯膜(Millipore，美國)?？笶-鈣粘蛋白抗體(1:500，ab4077
貴州醫藥 2020年12期2021-01-19
- MicroRNA-212-3p與靶基因轉化生長因子-β2基因3'UTR的關系研究*
β2-Luc 共轉染Saos-2細胞37℃水浴復蘇Saos-2 細胞，加入DMEM 培養基（含10% FBS）后置于37℃、50%二氧化碳培養箱內培養。用DMEM 培養基（含10% FBS）制備Saos-2 單細胞懸液，按照2×105個/孔的密度將細胞均勻地接種到細胞培養板（12 孔），置于37℃、5%二氧化碳培養箱中培養，待細胞密度達1.8×105個/孔時，使用無血清DMEM 培養基培養2 h 后進行轉染。使用LipofectamineTM2000 進行
中國現代醫學雜志 2020年24期2021-01-04
- miR-203a-3p抗彌漫性大B細胞淋巴瘤的作用及機制研究
C-mimic共轉染，24 h后使用雙熒光素酶測定系統測定熒光素酶活性。1.2.7免疫印跡 收集細胞并用RIPA裂解液提取總蛋白，使用BCA試劑盒測定蛋白濃度。上樣后用轉膜儀將蛋白轉移至PVDF膜，用5%脫脂牛奶封閉1 h，洗膜后一抗孵育4 ℃過夜，加二抗室溫孵育2 h，ECL試劑檢測蛋白。2 結 果2.1miR-203a-3p在DLBCL組織中的表達水平 與RH組織比較，DLBCL組織中miR-203a-3p的表達水平顯著降低(P2.2過表達miR-20
福建醫科大學學報 2020年5期2020-12-15
- LncRNA SOX2OT海綿吸附miR-34a促進SOX2表達增強大腸癌多藥耐藥
mimic(共轉染SOX2OT、NC mimic)、SOX2OT+miR-34a(共轉染SOX2OT、miR-34a mimic)。取對數生長期HCT-116細胞，0.25%胰蛋白酶消化，以5×103個/孔的濃度接種于96孔板中，每孔加入100 μL完全培養基。過夜貼壁后加入5個濃度梯度的5-FU、VCR、CDDP和TAXOL，每孔設3個復孔，孵育48 h后，每孔加入10 μL CCK-8溶液，待其完全混勻，放入孵箱中繼續培養2 h。用酶標儀測定各孔OD
實用腫瘤學雜志 2020年5期2020-11-13
- 利用同源重組技術構建Hoxa5、BMP6真核表達載體及共轉染成纖維細胞表達
載體通過與單、共轉染比較基因表達量的變化來研究Hoxa5和BMP6之間的作用關系，旨在為更深層次上研究毛囊功能基因奠定基礎。1 材料和方法1.1 試驗材料健康的30日齡胎羊由青島畜牧所奧特種羊場提供；TRIzol、KpnⅠ、倒置顯微鏡、熒光定量PCR等均購自Bio-Rad公司[9]。1.2 試驗方法1.2.1 引物設計 選取綿羊Hoxa5基因(GenBank登錄號為NM-001009431.1)CDS區 和BMP6基因(GenBank登錄號為NM-0011
華北農學報 2020年4期2020-08-31
- 利用同源重組構建Chordin、BMP6 真核表達載體及共轉染成纖維細胞表達的研究
、BMP6質粒共轉染成纖維細胞后在細胞水平上驗證兩基因間的相互作用，為進一步的分子育種工作提供依據。1 材料與方法1.1 實驗材料 選取40 日齡的健康胎羊（由青島奧特種羊場提供）并及時消毒處理。TRIZol（Roche）試劑、蛋白裂解液、EcoRI 限制性內切酶、KpnI 限制性內切酶、T4 DNA 連接酶、pcDNA3.1 質粒、DH5α感受態細胞、DMEM（基礎培養基）、胰蛋白酶、標準胎牛血清、DPBS（磷酸緩沖鹽溶液）、Lipofectamine
中國畜牧雜志 2020年7期2020-07-24
- EIAV Rev 蛋白拮抗eqTRIM5α介導的AP-1 信號通路的機制研究
性對照；第二組共轉染450 ng peqTRIM5α-HA+450 ng pcDNA3.1質粒；第3 組共轉染450 ng peqTRIM5α-HA+450 ngpEIAV-Rev-HA 質粒；第4 組共轉染450 ng pEIAVRev-HA+450 ng pcDNA3.1 質粒，上述各組均同時轉染100 ng pGL3-AP-1-Luc（報告質粒）和5 ng pRL-TK（內參質粒）。每組分別做3 個重復。轉染24 h 后，兩個重復組棄去上清液，每孔加
中國預防獸醫學報 2020年1期2020-06-05
- CARMA3和MMP-9在乳腺癌細胞增殖侵襲中的作用
行下一步檢測。共轉染pCMV6-CARMA3+MMP-9 siRNA，方法按上述步驟轉染pCMV6-CARMA3，36小時后收集細胞檢測。實驗分為pCMV6-CARMA3組、空載體組、control siRNA組、MMP-9 siRNA組和共轉染pCMV6-CARMA3+MMP-9 siRNA組。1.2.3 CARMA3與MMP-9蛋白的表達 采用Western blot法對比乳腺癌細胞系與乳腺正常上皮細胞系中CARMA3與MMP-9蛋白的表達。收集乳腺癌
浙江實用醫學 2020年6期2020-05-08
- siRNA下調VEGF基因沉默對人舌癌細胞株Tca8113的生物學作用
式細胞術結果在共轉染Tea8113細胞培養24 h后，進行流式細胞儀分析，結果顯示，G0/G1期細胞增多，S期細胞減少， G2/M期細胞相對增多，且細胞凋亡率升高與脂質體空載組及正常對照組相比差異非常顯著。見表2。表1 siRNA正義組與其他各組對Teag8113細胞增殖抑制率表2 轉染siRNA24 h后細胞周期進程及凋亡率2.5 VEGF含量表達siRNA轉染Teag8113細胞上清液中VEGF含量檢測明顯低于各對照組，差異有統計學意義。見表3。表3
中國實驗診斷學 2019年11期2019-11-26
- 流感病毒NS1蛋白與宿主蛋白DOK6的相互作用研究
5-DOK6 共轉染至6 孔板中密度為80 %的293T 細胞，同時分別轉染pCAGGS-Flag-NS1+pCAGGS 和 pCAGGS-V5-DOK6+pCAGGS 作 為對照，每種質粒各1 g。轉染48 h 后，按200 μL/孔加入NP40 (含PMSF)，裂解細胞30 min，離心，收集上清全細胞裂解液(Whole cell lysates，WCL)，取20 μL 作為對照 ，剩余的樣品加入20 μL Anti-Flag M2 親和瓊脂糖珠過夜結
中國預防獸醫學報 2019年10期2019-11-22
- miR-195過表達對人口腔鱗癌細胞增殖的影響及機制
5 mimic共轉染組(轉染FGF7-wt+miR-195)、FGF7-wt與對照共轉染組(轉染FGF7-wt+vector)、FGF7-mut與miR-195 mimic共轉染組(轉染FGF7-mut+miR-195)、FGF7-mut與對照共轉染組(轉染FGF7-mut+vector)，分別完成轉染48 h后收集細胞，根據雙熒光素酶活性檢測試劑盒說明書，檢測熒光素酶活性，實驗重復3次。1.5 SCC-4細胞內miR-195、FGF7 mRNA表達檢測
山東醫藥 2019年25期2019-09-18
- miR-105靶向調控FUT4影響骨關節炎軟骨細胞增殖和凋亡的研究
si-NC組；共轉染miR-105模擬物和FUT4 cDNA的細胞記為miR-105 mimic+pc-FUT4組，共轉染miR-105模擬物和FUT4 cDNA對照的細胞記為miR-105 mimic+pc-NC組；共轉染miR-105抑制劑和FUT4 siRNA的細胞記為miR-105 inhibitor+si-FUT4組，共轉染miR-105抑制劑和FUT4 siRNA對照的細胞記為miR-105 inhibitor+si-NC組。1.6 雙熒光素酶
中華骨與關節外科雜志 2019年6期2019-07-22
- miR-130b對宮頸癌細胞修復TNF-α誘導性基因組雙鏈DNA斷裂作用的影響及機制
酸(NC組)，共轉染pcDNA3.1-CDKN1A和miR-130b mimics (CDKN1A+miR-130b組)、pcDNA3.1和miR-130b mimics (pcDNA3.1+miR-130b組)。轉染4 h，更換新鮮培養液繼續培養。1.3 miR-130b、CDKN1A影響細胞修復雙鏈DNA斷裂觀察1.3.1 細胞干擾處理 CDKN1A組、pcDNA3.1組細胞轉染培養24 h后，分別用終濃度為100 ng/mL TNF-α或PBS處理細
山東醫藥 2019年2期2019-02-15
- miR-9對人胃癌細胞株活化白細胞黏附分子基因表達的靶向調控作用
μg質粒進行共轉染。實驗分組如下：(1)未轉染的空白對照組；(2)共轉染miR-NC、psiCHECK-2-ALCAM或psiCHECK-2-ALCAM-mut；(3)共轉染miR-9 mimics、psiCHECK-2-ALCAM或psiCHECK-2-ALCAM-mut；(4)共轉染miR-9 inhibitor、psiCHECK-2-ALCAM或psiCHECK-2-ALCAM-mut；每組設4個復孔。轉染24 h后，每孔用PBS洗2次，加入100
胃腸病學和肝病學雜志 2019年1期2019-01-24
- 慢病毒介導miR-34a表達對視網膜母細胞瘤自噬的影響及機制研究△
MGB1載體及共轉染miR-34a+HMGB1的慢病毒載體及培養液接種至Y79細胞。按照接種載體分組，將Y79細胞株分為4組，分別為轉染miR-34a組、轉染HMGB1組、共轉染miR-34a+HMGB1組及陰性對照組。1.2.2miR-34a慢病毒載體的構建及cDNA轉染獲取的人miR-34a序列，從Genbank中查閱HMGB1的cDNA序列，設計合成miR-34a及HMGB1前體引物，采用PCR方法擴增含miR-34a及HMGB1前體片段，并克隆至慢
眼科新進展 2019年1期2019-01-10
- miR-26a靶向HMGA1基因對結腸癌細胞生長、侵襲和遷移的影響
建好的質粒進行共轉染并分為3組，即miR-NC+miR-26a mimics組、Wt-HMGA1+miR-26a mimics組和Mut-HMGA1+miR-26a mimics組。置于37℃、5%CO2培養箱中培養24 h后收集細胞，采用雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒檢測各組SW480細胞中雙熒光素酶活性。1.5 CCK8法檢測人結腸癌SW480細胞增殖活力 取轉染后生長至對數期的 miR-NC組、miR-26a mimics組和miR-26a inhib
吉林大學學報（醫學版） 2018年6期2018-11-28
- miR-581對結直腸癌細胞增殖與侵襲的影響及機制
miR-581共轉染到HEK293細胞中，質粒轉染后48 h據Promega公司操作說明，裂解細胞，加入熒光素酶底物，檢測熒光素酶活性，驗證miR-581能否與PRDX1 3′UTR結合，證明miR-581是否能直接調控PRDX1。1.7 SW620細胞中PRDX1蛋白表達檢測 采用Western blotting法。根據PRDX1蛋白相對分子質量大小，配制凝膠，根據所測蛋白濃度適量加入蛋白樣品及每孔5 μL的蛋白Marker；跑膠，首先加壓80 V，保證
山東醫藥 2018年25期2018-07-20
- 基于miRNA-10b調控宮頸癌LncRNA-H19網絡通路機制的研究
RNA-10b共轉染組比較，pDNA-H19和miR-10b 共轉染組的miR-10b表達量下降(P0.05),說明H19 抑制miRNA-10b的表達，見圖1。向過表達H19的HeLa細胞轉染miRNA-10b或miRNA-10 inhibitor共轉染組細胞增長明顯高于pcDNA-mut-H19和miRNA-10b共轉染組(P圖1H19可抑制miRNA-10b的表達2.2H19促進IGF1R表達用Western blot檢測IGF1R蛋白表達量顯示，p
中國實驗診斷學 2018年3期2018-03-26
- miR—1203和HOTAIRrs7958904位點對乳腺癌細胞生長的影響
1203模擬物共轉染細胞，檢測熒光素酶的表達。過表達載體、miR-1203模擬物或抑制物單獨或共轉染乳腺癌細胞，熒光定量PCR檢測HOTAIR表達，BrdU檢測細胞增殖，Annexin V-FITC/PI檢測細胞凋亡，Transwell法檢測細胞侵襲。 結果 HOTAIR突變型增強了miR-1203對其的靶向結合；miR-1203可以下調突變型HOTAIR的表達，差異有高度統計學意義（P < 0.01）；但對野生型HOTAIR影響不顯著（P > 0.05）
中國醫藥導報 2018年3期2018-03-07
- 何首烏中THSG和蒽醌類成分對人孕烷X受體介導的CYP3A4的調控作用
的報告基因載體共轉染HepG2細胞，10 μmol·L-1利福平（RIF）為陽性對照，10 μmol·L–1酮康唑（TKZ）為陰性對照，用THSG（2.5，5，10 μmol·L-1）和蒽醌類成分（2.5，5，10 μmol·L-1）分別處理24 h，進行雙熒光素酶活性檢測。結果表明，空載質粒pcDNA3.1與pGL4.17-CYP3A4共轉染時，THSG、大黃酚、大黃素甲醚、大黃酸、蘆薈大黃素對CYP3A4的調控多為抑制效應，大黃素對CYP3A4產生誘導
中國中藥雜志 2017年24期2018-01-29
- miR-125b靶向Smad4調控非創傷性股骨頭壞死骨髓基質干細胞成骨分化與增殖的相關性
好的質粒做三組共轉染，即Wt-Smad4與miR-125b mimics、Mut-Smad4和miR-125b mimics以及 miR-NC與miR-125b mimics，檢測熒光素酶的活性；BMP-2誘導HMSC-bm分化，將miR-125b mimics和si-Smad4轉染到分化的細胞內，以不轉染的細胞作為參照，檢測miR-125b靶向Smad4對細胞分化的影響；將miR-125b mimics、miR-125b inhibitor和miR-NC
中國老年學雜志 2017年2期2017-02-14
- 綿羊肺腺瘤病毒SU蛋白與Hyal-2蛋白的結合域研究
-hyal-2共轉染293T細胞，運用激光共聚焦方法結合免疫共沉淀方法確定SU蛋白和Hyal-2蛋白可能結合區域。激光共聚焦顯微鏡觀察結果表明,SU1-SU5與Hyal-2均存在細胞內共定位。免疫共沉淀方法檢測缺失型蛋白SU1-SU5與綿羊Hyal-2均不存在相互作用。su基因所缺失區域238 bp～867 bp對于SU蛋白與受體的結合都是必不可少的。關鍵詞：綿羊肺腺瘤病毒；SU蛋白；Hyal-2蛋白；結合區域綿羊肺腺瘤病(OPA)是由綿羊肺腺瘤病毒(Ov
動物醫學進展 2016年4期2016-05-10
- SOCS3通過PYK2信號通路調控小細胞肺癌的HI F-1α表達及增殖潛能△
-HIF-1α共轉染細胞株。1.2..22免疫熒光檢測 使用紅色熒光標記，在倒置熒光顯微鏡下，分別檢測已轉染細胞株及未轉染細胞株中SOCS3的表達水平。1.2..33細胞生長曲線的繪制 將人小細胞肺癌株NCI-H446細胞、Ad5轉染細胞株、Ad5-SOCS3轉染細胞株和Ad5-SOCS3-HIF-1α共轉染細胞株分別移至培養基中培養，于第4、8、12、16、20、24、28天使用細胞計數板分別計算細胞增殖數。檢測SOCS3單獨轉染及SOCS3與HIF-1
癌癥進展 2015年1期2015-12-22
- 靶向豬ATGL 基因的miRNA預測及鑒定
iRNA模擬物共轉染HEK 293T細胞，最終利用雙熒光素酶報告基因法來檢測熒光素酶活性。試驗成功構建了含豬ATGL基因3′UTR序列的重組載體pMIR-ATGL-3′UTR，雙熒光素酶報告基因試驗顯示ssc-miR-769-3p、ssc-miR-1343、ssc-miR-7137-3p、ssc-miR-671-5p、ssc-miR-149能下調293T細胞中pMIR-ATGL-3′UTR的熒光素酶活性，而點突變試驗證實了ssc-miR-1343與ssc-
畜牧獸醫學報 2015年8期2015-03-22
- CBF-β 輔助SIVagm Vif 蛋白誘導限制因子APOBEC3G 的降解
A3.1 質粒共轉染293T 細胞；實驗組將3 μg pcDNA-SIVVif-HA 與CBF-β 質?；蛘呦鄳康膒cDNA3.1 質粒共轉染進293T 細胞。轉染24 h 之后換成含有終濃度100 μg/mL CHX(放線菌酮)的完全培養液，分別在加入CHX 后的0 h、1 h、2 h、6 h 和12 h 收 獲細胞，并將細胞裂解。進行SDS-PAGE，將轉印蛋白的PVDF 膜用5 %的脫脂乳封閉，分別以HA 抗體(1∶10 000)、Flag 抗體(
中國預防獸醫學報 2015年10期2015-03-09
- 乙型肝炎病毒前S2蛋白激活人?；鞍琢蝓ッ?啟動子*
)-preS2共轉染人肝癌細胞系HepG2，然后通過檢測細胞熒光素酶活性來評價preS2對人APT1基因啟動子的作用。數據用獨立樣本t檢驗分析。結果測序結果證實pcDNA3.1(-)-preS2與pGL3-APT1與實驗設計相符。pGL3-APT1的熒光素酶活性是陽性對照質粒pGL3-Control的熒光素酶活性的1.2倍(P肝炎病毒,乙型;病毒蛋白類；蛋白質前體；?；鞍琢蝓ッ?；啟動子；反式激活乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)
重慶醫學 2015年29期2015-01-07
- CD14對生殖支原體LAMPs激活NF-κB的影響
g。1.2.5共轉染及NF-kB活性的測定 ①以pcDNA-CD14，pFLAG-TLR2， pNF-kB-luc及pRL-TK質粒共轉染Hela細胞24 h后，再用LAMPs刺激8 h；②LAMPs用10 μg/mL sCD14 37℃共孵育30 min后，再刺激0.1 μg/mL pFLAG-TLR2，0.05 μg/mL pNF-kB-luc，0.005 μg/mL pRL-TK共轉染的Hela細胞8 h。分別消化收集HeLa細胞，加入細胞裂解液20
中國人獸共患病學報 2014年8期2014-04-02
- 雙分子熒光互補系統的構建及其在病毒學中的初步應用
00 ng進行共轉染。具體步驟參照Fugene HD試劑說明書執行。待轉染16 h后，棄去部分培養基，然后將細胞置于熒光倒置顯微鏡下觀察熒光并拍照保存。2 結果2.1 Venus突變體的構建根據突變體Venus與EYFP序列比較結果顯示，Venus共存在5個特異的氨基酸位點突變，分別為:F46L、F64L、M153T、V163A、S175G。構建示意圖如圖1所示。在突變PCR過程中，為便于以后插入目的基因，在其N端分別引物了EcoRI，BamHI和XhoI
中國動物傳染病學報 2013年3期2013-07-04
- 小鼠DUSP1 3'-UTR雙熒光素酶報告基因表達系統的建立及功能鑒定
作為陽性對照)共轉染，0.2μg LuDP/RL分別與0.1μg HuR表達載體(pcDNA 3.1-HuR-FLAG)和pCDNA3.1(作為對照)共轉染，0.2μg LuDP/RL分別與50nmol/L mmu-miR101a和Control dsRNA(作為對照)共轉染，48h后收獲細胞，采用Dual-Luciferase?Reporter Assay System檢測試劑盒檢測熒光素酶活性，具體操作按說明書進行。圖1 小鼠DUSP1 3'-UTR序
解放軍醫學雜志 2013年4期2013-04-01
- 豬繁殖與呼吸綜合征病毒相關豬microRNA的初步篩選
K－utr質粒共轉染SUVEC，設立空載體對照，依照LipofectamineTM2000試劑說明轉染96孔板，各自設置6個復孔，轉染設置組如下：1：psiCHECKTM－2vector，2：psiCHECK－utr，3：miRNA control；psiCHECK－utr，4：inhibitor control；psiCHECK－utr，5：miR－323；psiCHECK－utr，6：miR－323inhibitor；psiCHECK－utr，7：mi
中國獸醫雜志 2012年3期2012-11-23
- pBIFC-VN173-CXCR4 和pBIFC-VC155-NT21MP 真核表達質粒的構建及其在活細胞內的作用
.6 重組載體共轉染COS-7 細胞 將COS-7 細胞接種于24 孔板，每孔105個細胞，于500μl 無抗生素DMEM 完全培養液(含10%胎牛血清)中37℃、5%CO2培養箱培養，待細胞融合度達80%至90%且細胞生長狀態良好時進行轉染。轉染分組:①pBIFC-VN173 和pBIFCVC155 共轉染組;②pBIFC-VN173-CXCR4 轉染組;③pBIFC-VC155-NT21MP 轉染組;④pBIFCVN173-CXCR4 和pBIFC-V
浙江大學學報（醫學版） 2012年5期2012-01-22
- hTPO和hNIS共轉染肺癌細胞系H460介導放射性碘攝取的研究
增高，我們同時共轉染入人甲狀腺過氧化物酶（human thyroperoxidase, hTPO）基因，從而達到提高治療效果的目的。1 材料與方法1.1 材料和儀器 H460人大細胞肺癌細胞由中國醫學科學院放射醫學研究所惠贈，pcDNA3.1/hNIS質粒由本實驗室構建并保存。G418硫酸鹽、DMEM高糖型培養基和脂質體（LipofectamineTM2000）購自美國Invitrogen公司；實驗用酶類均購自日本Takara（寶生物）公司。125I購自中
中國肺癌雜志 2010年6期2010-09-11
- TMD2前斷裂CFTR翻譯后的連接及氯離子通道功能
真核表達載體，共轉染培養的真核細胞，瞬時表達觀察CFTR的剪接，膜片鉗記錄細胞的 CI?電流和通道開放活性，為運用雙AAV載體轉CFTR基因的CF基因治療研究提供實驗依據。1 材料與方法1.1 實驗材料質粒pMST (含split Ssp DnaB intein編碼序列)由加拿大Dalhousie大學醫學院Paul Liu教授實驗室提供。含CFTR的質粒pIRES2-EGFP-CFTR和幼年倉鼠腎臟細胞 (Baby hamster kidney，BHK)
生物工程學報 2010年12期2010-02-09